本研究以传染病学实验室分离的猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2，PCV2)ZS株为研究对象，参照GenBank己发表的ORF2基因序列，设计合成一对引物，用PCR方法扩增了ORF2基因，大小为718bp，覆盖完整ORF2基因序列。将PCR.产物纯化后克隆到pFastBacHTA转移质粒中，得到重组转移质粒pFastBacHTA-ORF2。酶切鉴定后进行序列测定，与GenBank上已发表的其它毒株序列进行核苷酸及其推导氨基酸同源性比较，结果表明本毒株的ORF2基因与其它参考毒株核苷酸序列同源性为91.7％～99.6％，推导的氨基酸序列同源性介于91.9％～99.1％之间。 pFastBacHTA-ORF2转化DHl0Bac E.coli细胞，在其体内通过转座作用将目的基因插入Bacmid(含杆状病毒基因组)，通过含三抗、IPTG和X-gal的平板蓝白斑点筛选得到白色阳性菌。抽提得到重组转染载体Bacmid-pFastBacHTA-ORF2。PCR鉴定为阳性以后，转染Sf9细胞，获得了重组杆状病毒。将其感染High Five细胞表达重组融合蛋白，SDS-PAGE分析显示，重组蛋白得到表达，分子量约为32kD；同时确定最佳表达时间为96h。Western-blot结果显示重组蛋白可被特异性多克隆抗体所识别，表达产物抗原性良好。在High Five细胞内大量表达重组融合蛋白，并用Ni亲和柱对其进行纯化，SDS-PAGE分析显示，表达产物纯化良好。 大量提取、纯化质粒pcDNA3.1-ORF2与纯化后的重组融合蛋白(ΔCap)分别免疫6w龄的BALB/c小鼠，同时设对照组，以比较PCV2亚单位疫苗和基因疫苗的免疫效果。第一次免疫后的10d和24d分别进行二免和三免。二免后lOd和三免后7d断尾采血，分离血清用于检测血清中的抗体。三免后7d每组扑杀5只.BALB/c小鼠，制备脾淋巴细胞，用MTT法测定其淋巴细胞转化率。结果表明，免疫组均能诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应，相比之下，亚单位疫苗免疫组的免疫效果优于基因疫苗免疫组。 本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达了包含PCV2ORF2基因的重组融合蛋白，为进一步在昆虫蛹内更大量表达重组蛋白、研制PCV2诊断试剂及猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定了基础。将表达的重组蛋白纯化后制成亚单位疫苗，显示其具有良好的免疫原性，免疫效果优于基因疫苗，为防制PCV2感染提供了较为理想的候选疫苗，对进一步研制PCV2基因工程疫苗奠定了良好的基础。