大蒜未受精子房离体培养的研究

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试验选取六个不同基因型的大蒜品种,分别进行大蒜花器官的培养,获得发育良好的大蒜子房。以大蒜未受精子房为试材,在适宜的培养条件下完成了愈伤组织的诱导及分化,获得了再生植株,建立了大蒜单倍体植株再生体系。此外还研究了大蒜未受精子房诱导愈伤组织的影响因素,进一步优化了大蒜子房培养技术体系。结果表明:1大蒜子房愈伤组织诱导及分化需要适宜的培养基条件。以‘糙蒜’品种的未受精子房为试材进行离体培养,B5培养基及MS培养基上均能形成愈伤组织,B5培养基效果优于MS培养基;N6培养基不能诱导形成愈伤组织,不宜用于大蒜子房愈伤组织的诱导。诱导大蒜子房愈伤组织的适宜激素组合为2mg·L-16-BA+1mg·L-1NAA,愈伤组织诱导率可达11.11%。在B5培养基上添加3mg·L-16-BA+1mg·L-1NAA,不定芽的分化频率最高,可达46.15%。诱导生根的最佳培养基为B5+0.05mg·L-1NAA。2低温预处理和短期热激处理均可提高大蒜子房愈伤组织的诱导率。以‘糙蒜’和‘正月早’开花前12d的未受精子房为试材,进行分别0(CK)、1、2、4、6d的4℃低温预处理和35℃0(CK)、12、24、36、48h的热激处理,发现4℃低温处理4d可明显提高愈伤组织的诱导率,35℃处理48h可显著提高诱导率。但经过热激处理的子房不论处理时间长短,褐化均较为严重,褐化率都在60%以上,不宜采用。3基因型不同,子房愈伤组织的诱导情况不同。分别以‘糙蒜’、‘二水早’、‘蒲棵’、‘正月早’、‘红七星’六个不同品种的开花前12d的大蒜未受精子房为试材,发现糙蒜品种的子房愈伤组织诱导率最高,为11.11%;其次为‘正月早’、‘蒲棵’、‘红七星’、‘二季早’,‘二水早’的子房愈伤组织诱导率最低为0。4子房发育程度对愈伤组织诱导有一定的影响。以‘糙蒜’、‘蒲棵’、‘正月早’三个品种的子房为试材,分别对开花当天、开花前23d、开花前67d的大蒜子房进行培养,发现三个品种均以开花当天的子房愈伤组织诱导率最高,诱导率分别为13.82%、8.00%和13.25%。5以正常二倍体大蒜叶片为对照,利用流式细胞仪对再生植株进行倍性鉴定。研究发现,‘糙蒜’品种由愈伤组织诱导分化而成的16株再生植株中,14株为单倍体,其余2株为二倍体;由雌核发育胚途径产生的2株再生植株为单倍体。
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