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目的： 机体接触包括蠕虫在内的病源微生物机会减少,尤其在幼年时期免疫系统失去病源微生物的塑造和协调,是导致西方发达国家自身免疫性疾病和过敏性疾病发病率迅速增高的主要原因之一。蠕虫感染能激发强烈的Th2免疫应答,可以改善Th1介导的自身免疫性疾病的临床症状和病理过程。日益增多的流行病学及实验研究证实了蠕虫对自身免疫性疾病及过敏性疾病的保护作用,显示了优异的临床应用价值。目前利用猪鞭虫卵治疗炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)患者已取得良好的临床效果。 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种严重危害人类健康的慢性自身免疫性疾病,该病发病率和致残率高,目前仍无有效的治疗方法。研究表明,CD4+效应T细胞和调节性T细胞免疫失衡参与RA发病的各个环节,RA的致病与Th1/Th17密切相关。日本血吸虫感染可诱导强烈的Th2优势应答。本研究试图利用血吸虫感染和血吸虫抗原诱导的Th2免疫偏移来恢复RA失衡的Th免疫应答。用CIA鼠构建血吸虫感染的RA模型,观察CD4+T细胞亚群的网络调节,探讨RA的发病、转归及免疫抑制性的治疗作用。为筛选特异性抑制RA过度的Th1/Th17免疫应答的新型免疫调节剂奠定基础。 方法: 建立雄性DBA/1小鼠胶原性关节炎(Collagen Induced-arthritis,CIA)模型,分别用单、双性日本血吸虫尾蚴(25±2条)于造模前2W、造模后4W(关节炎模型建立后)经腹部皮肤感染小鼠, SPF级环境饲养,关节炎指数评价多发性关节炎病变的发生及严重程度。12W后处死动物,ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清胶原特异IgG、IgG1、IgG2a水平,比较血吸虫干预对CIA鼠自身抗体形成的影响;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测脾淋巴细胞CD4+T细胞亚群,分析血吸虫感染对T细胞免疫应答的作用;Real time PCR检测炎症关节内部细胞因子mRNA表达水平;取足爪组织观察血吸虫感染对小鼠关节炎组织病理学的影响;评价血吸虫活虫感染对自身免疫性关节炎小鼠的免疫调节作用。 结果: 与对照组相比,预先感染日本血吸虫尾蚴显著减轻小鼠关节炎的病情,降低关节炎的发病率,改善病理损害;血清中胶原特异性IgG、IgG2a显著降低,IgG1水平升高;脾淋巴细胞应对多克隆及抗原特异性刺激诱发的增殖反应明显降低;日本血吸虫感染显著抑制CIA小鼠IFN-γ+CD4+T细胞比例,提高IL-4+CD4+T细胞百分比。仅在双性感染的CIA鼠发现CD25highCD4+Treg(regulatory T cells,Treg)的增殖及IL-17+CD4+T细胞的抑制。血吸虫感染显著降低了脾细胞培养上清中INF-γ、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平,提高IL-10表达。此外,血吸虫感染显著上调炎症关节内部炎症因子及NF-κB配体-受体活化因子(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的表达。对于已经建立的感染模型并出现明显临床症状的CIA小鼠,感染血吸虫尾蚴不仅不能改善病情,反而加重病情。 结论: 日本血吸虫预先感染诱导的Th2优势应答可显著抑制CIA异常的Th1应答,减少炎症介质的释放,减轻病情,改善病理损害;双性感染还可上调Treg,抑制CIA小鼠过度的Th17应答。血吸虫感染对CIA的保护作用依赖于Th2优势应答的预先建立,使异种Ⅱ型胶原不能有效启动致病性的Th1免疫应答。血吸虫成虫抗原亦能有效激发抗炎性的Th2优势应答。