【摘 要】
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目的:结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是最常见的恶性癌症类型的一种,并且发病率每年均在逐渐上升。结直肠癌往往到晚期才被查出,早期不易发现,患者的预后生存情况因此也较差。研究结直肠癌的关键基因组结构及其功能有助于进一步明确结直肠癌的分子机理,为临床诊断、药品检测和预后分析提供了新的生物标志物。转录组测序是一种高通量技术,用于提供整个转录组的全面视图,有助于识别新基因、基因特异性
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目的:结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是最常见的恶性癌症类型的一种,并且发病率每年均在逐渐上升。结直肠癌往往到晚期才被查出,早期不易发现,患者的预后生存情况因此也较差。研究结直肠癌的关键基因组结构及其功能有助于进一步明确结直肠癌的分子机理,为临床诊断、药品检测和预后分析提供了新的生物标志物。转录组测序是一种高通量技术,用于提供整个转录组的全面视图,有助于识别新基因、基因特异性表达以及不同组的差异基因表达等。本试验将采用对已稳定过表达并敲低SETDB1（set domain bifurcated 1,SET结构域分支型1）水平的人类结直肠癌细胞株的转录组进行检测分析,筛选出最显著的差异基因C5AR1,初步探讨其在结直肠癌中的功能与分子机制。方法:1、使用测序技术,分析并得到了通过SETDB1过表达与敲低后的表达差异基因C5AR1;2、采用q RT-PCR技术与Western Blot技术,测定了五株人结直肠癌细胞株中C5aR1的表达状况;3、使用转染的方式,分别构建敲低C5aR1后的HCT116、SW620细胞,以及过表达C5aR1的RKO细胞;4、采用CCK8实验、平板克隆形成实验、划痕实验以及Transwell实验分别测定了C5aR1敲低和过表达对结直肠癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响;5、经过Western Blot检测敲低与过表达C5aR1后,对结直肠癌细胞株上皮间质转化的影响;8、经过Western Blot检测敲低与过表达C5aR1后,对结直肠癌EMT相关Wnt/β-catenin通路关键蛋白表达的影响。结果:1、通过测序数据,分析发现SETDB1过表达组与对照组差异表达的基因共298个,其中SETDB1过表达后出现上调表达的基因共81个;SETDB1敲低组与对照组差异表达的基因共535个,其中SETDB1敲低后同样出现表达下调的基因共237个,其中与SETDB1变化一致并最显著差异的基因为C5aR1。2、Western Blot和RT-q PCR结果显示:在HCT116、SW620、SW480、RKO、Lo Vo细胞中,HCT116与SW620中的C5aR1蛋白表达最高,RKO中表达最低。3、C5aR1对结直肠癌细胞体外生物学行为的相关作用:敲低C5aR1可以抑制HCT116与SW620的体外增殖、迁移与侵袭能力;过表达C5aR1则可以增强RKO的体外增殖、迁移与侵袭能力;4、C5aR1对结直肠癌细胞EMT的相关影响:敲低C5aR1后,HCT116与SW620细胞E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调;过表达C5aR1后,RKO细胞E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调;5、C5aR1对结直肠癌细胞Wnt/β-catenin通路关键蛋白的相关影响:C5aR1过表达,细胞核中β-catenin表达上调,C5aR1敲低后,β-catenin表达下调。结论:1、SETDB1过表达与敲低后,对结直肠癌细胞的促癌与抑癌作用引起C5AR1基因改变最显著。2、C5aR1促进结直肠癌细胞在体外增殖、迁移与侵袭的过程。3、C5aR1可能通过调控Wnt/β-catenin通路,加快结直肠癌细胞的EMT进程。
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