背景：心律失常是临床上常见且又对患者的生活质量和生命安全影响极大的心血管疾病。长期以来，人们一直致力于抗心律失常治疗的研究。随着科学技术的进步，心律失常的非药物疗法，如除颤、起搏、射频消融、手术等在临床治疗中虽然起到越来越大的作用，但是许多类型的心律失常至今仍依赖于药物治疗，抗心律失常新药开发仍然是我国防治快速性心律失常的重要研究内容。临床心律失常的种类繁杂，不能用一种机制来解释其发生的原因，从根本上说心肌细胞膜离子通道表达或功能异常将会影响动作电位的时程，进而引起心脏不同部位复极离散增大，是形成各种心律失常的最重要的病理生理基础。目前临床应用的抗心律失常西药主要包括钠通道阻断剂、β受体阻断剂、延长动作电位时程药（主要是钾离子通道阻断剂）和钙离子通道阻断剂。尽管药物分类不同，其作用机制有差异，归根到底是通过对各种心肌细胞离子通道功能的调节来起作用的。药物在发挥抗心律失常作用的同时，有潜在的致心律失常发生的危险，尤其是导致继发性QT间期延长和尖端扭转型室性心动过速，可增加患者死亡率。从90年代CAST和CASTII试验结果公布以来，人们开始重视抗心律失常药物治疗的收益与风险评估。重新评价临床应用的一些抗心律失常药物的安全性，以及开发广谱有效且副作用低的新型抗心律失常药物是目前研究的热点。能够改善离子通道紊乱并恢复其正常生理功能的药物，才能防治心律失常的发生并提高远期疗效。同西药相比，抗心律失常作用的中药不仅对心脏离子通道功能有影响，而且中药往往是复合药物，具有多离子通道靶点的作用，因而毒性低副作用小。从中药中筛选出高效、低毒的抗心律失常药物是我国中药现代化的重要组成部分。用科学的方法来研究和评价中药的抗心律失常作用机理，对于指导临床用药和研发新药都有着重要的意义。参松养心胶囊（SSYX）是一种复方制剂，方中多数药物均有较好的抗心律失常作用。动物实验证明，SSYX可以明显抑制药物诱发的心律失常；随机临床验显示，SSYX对治疗冠心病心律失常有明显疗效。关于SSYX抗心律失常的机制和对心肌细胞离子通道的影响至今未见报道。目的：观察SSYX干粉提取溶液对单个心室肌细胞L型钙电流(I_Ca，L)，钠电流(I_Na)，瞬时外向钾电流（I_to）)，内向整流钾电流(I_K1)，延迟整流钾电流慢成分(I_Ks)的影响，以及对在HEK293细胞表达hERG通道电流(I_Kr)的影响。探讨SSYX在离子通道水平的抗心律失常作用机制。方法：急性分离豚鼠和大鼠心脏，用Langendoff灌流系统离体灌流，联合使用胶原酶Ⅱ和蛋白酶E，分离获得单个的心室肌细胞。培养HEK293细胞，用脂质体瞬时转染pcDNA3.1-hERG和pEGFP-C1质粒，于转染后24～48h在荧光显微镜下，对有绿色荧光表达的细胞进行电生理记录。用标准的全细胞膜片钳记录技术，记录豚鼠心室肌细胞的I_Ca，L，I_Na，I_k电流，大鼠心室肌细胞的I_to和I_K1电流，以及转基因阳性HEK293细胞的I_Kr电流。观察SSYX干粉提取溶液对各种离子通道电流的影响。结果：通过酶解法得到的豚鼠和大鼠心室肌细胞能够记录到动作电位和各种离子通道电流，表明其具有良好的细胞电生理特性。大约40％～60％瞬时转染后HEK293细胞表达绿色荧光蛋白，同时可记录到I_Kr通道电流，表明细胞模型构建成功。1．SSYX对动作电位的影响：在0.5％的药物使用前后，大鼠心室肌细胞的静息膜电位分别为-65.02±5.96mV和-62.67±7.59mV（n=6，P＞0.05）；动作电位超射幅度降低，超射值分别为101.31±8.78mV和84.84±5.47mV（n=6，P＜0.05）；复极时程延长，50％动作电位时程(APD₅₀)分别为23.92±5.50ms和41.99±5.39ms（n=6，P＜0.05）；90％动作电位时程(APD₉₀)分别为46.97±7.89ms和65.3±5.84ms（n=6，P＜0.05）。2．SSYX对I_Ca，L通道的影响：记录稳态激活的I_Ca，L电流，观察到药物对I_Ca，L有抑制作用。以测试电压为+10 mV引出的I_Ca-L峰值电流密度作为统计指标，当药物浓度为1％，0.5％，0.25％时，分别对I_Ca，L的峰值电流密度的抑制率为50.69％±5.64％，44.82％±6.50％，和19.22％±1.10％，（n=5，P＜0.05）。药物可以使I_Ca，L的电流密度-电压（I-V）曲线上移，但不改变其激活电压、峰值电压和反转电位。分别用单指数和双指数方程拟合+10 mV引出电流的时间依赖性激活和失活曲线，药物浓度0.5％时，用药前后通道的激活时间常数（τ）分别为1.04±0.17ms和1.52±0.19ms（n=6，P＜0.05），通道的快失活时间常数（τ_f）分别为13.00±3.72 ms和42.74±10.10ms（n=6，P＜0.05），慢失活时间常数（τ_s）分别为97.75±20.79 ms和177.26±28.29ms（n=6，P＜0.05）。用Boltzmann方程分别拟合稳态激活和失活曲线。0.5％SSYX不改变I_Ca-L稳态激活曲线，可使I_Ca-L稳态失活曲线左移，用药前后的失活半电压(V_1／2)分别为-15.38±2.4 mV和-20.44.2±5.01 mV（n=6，P＜0.05），斜率因子（K）分别为5.25±0.61和5.33±0.51（n=6，P＞0.05）。记录通道的失活后恢复曲线，用单指数方程为最佳拟合，得到恢复时间常数（τ），0.5％SSYX使τ从85.24±20.18ms增大到158.42±38.23 ms（n=5，P＜0.05）。3．SSYX对I_Na通道的影响：记录稳态激活I_Na的I-V曲线，0.5％SSYX在每一指令电压水平上都减小I_Na电流密度，但不改变激活电压、峰值电压、反转电位和曲线的形状。当药物浓度为0.5％时，在测试电压为-20 mV的条件下，可以使I_Na峰值电流密度从27.21±5.35（pA／pF）降至14.88±2.75（pA／pF），平均抑制率为44.84％±7.65％（n=5，P＜0.05）。用单指数方程拟合-20 mV条件下引出电流的时间依赖性激活和失活曲线，浓度0.5％药物使用前后，通道的激活τ分别为0.44±0.15ms和0.36±0.11 ms（n=5，P＞0.05）；失活τ分别为1.84±0.34ms和2.05±0.51 ms（n=5，P＞0.05）。0.5％药物使用前后，通道稳态激活V_1／2分别为-34.27±2.38mV和-31.40±1.63mV（n=5，P＜0.05）；稳态失活V_1／2分别为-73.68±4.80mV和-75.15±4.50mV（n=5，P＞0.05）。0.5％药物使用前后，通道的失活后恢复τ分别为19.03±1.13 ms和21.75±1.48 ms（n=5，P＞0.05）。4．SSYX对I_to通道的影响：当药物浓度0.5％时，在60mV条件下使大鼠心室肌细胞I_to电流峰值密度从-19.82±7.10（pA／pF）降至-10.02±3.93（pA／pF），平均抑制率为50.60±10.77％（n=6，P＜0.05）。用单指数方程拟合I_to通道的时间依赖性失活曲线，0.5％药物使用前后，失活的τ值分别为29.06±4.66ms和21.44±3.12ms（n=6，P＜0.05）；0.5％药物使I_to通道稳态失活曲线左移，用药前后的V_1／2分别为-15.67±2.52mV和-26.45±3.88mV，K分别为3.41±0.67和6.38±2.02（n=7，P＜0.05）。0.5％药物使用前后，I_to通道的失活后恢复减慢，τ分别为12.86±0.31ms和18.52±3.76ms（n=5，P＜0.05）。5．SSYX对I_K1通道的影响：药物浓度0.5％时，可以使大鼠心肌细胞I_k1内向成分降低，以测试电压-100mV时引出的电流为统计指标，I_k1电流密度从-10.78±1.80（pA／pF）降至-7.18±2.05（pA／pF），平均抑制率为33.10％±16.85％（n=11，P＜0.05），但药物不改变电流的翻转电位及整流特性。6．SSYX对I_Ks通道的影响：使用钾离子通道细胞内外液，维持电压-40mV，测试电压+50mV持续5s，可以在豚鼠心室肌细胞引出I_Ks电流。当SSYX药物浓度0.5％时，可以使豚鼠心肌细胞I_Ks最大电流密度从4.02±0.27（pA／pF）降低到1.39±0.30（pA／pF），平均抑制率为65.21％±8.5％（n=5，P＜0.05），同时对其尾电流的抑制率是30.77％±1.11％（n=5，P＜0.05）。7．SSYX对I_Kr通道的影响：为了更好的观察SSYX对单纯的I_Kr电流的影响，我们用HEK293细胞瞬时表达hERG基因来研究药物对I_Kr的影响。在转染hERG基因阳性的HEK293细胞上记录到的I_Kr自—20mv激活，外向电流随去极化而增大，约在+20mV达到最大值，之后随进一步去极化电流幅值下降，具有内向整流特性。0.5％SSYX对I_Kr电流无显著影响。用药前后，在Vt为+20mV时，峰值电流密度分别为18.56±2.47 pA／pF和16.57±3.57 pA／pF（n=5，P＞0.05）。用标化的I_Kr尾电流对测试电压作图，得到I_Kr的稳态激活曲线，用Boltzmann方程拟合曲线，得到用药前激活V_1／2和K分别为-3.78±5.30 mV和8.14±1.26，0.5％药物使用后V_1／2和K分别为-5.65±5.29 mV和8.43±1.79（n=5，P＞0.05）。0.5％药物使用前后，在Vt-20mV时I_Kr尾电流的失活时间常数分别为16.85±3.78和14.76±1.34（n=5，P＞0.05），I_Kr失活后恢复时间常数为6.29±0.84和5.94±0.50（n=5，P＞0.05），差异均无显著性。结论：参松养心胶囊干粉提取溶液对I_Ca，L、I_Na、I_to、I_Ks和I_K1多种心室肌离子通道均具有不同程度的阻滞作用。SSYX可以抑制豚鼠心室肌细胞I_Ca，L的峰值,电流，使通道的时间依赖性激活和失活减慢，并促进通道的电压依赖性失活，使稳态失活曲线的V_1／2左移。SSYX可以抑制豚鼠心室肌细胞I_Na的峰值电流，并使通道的稳态激活曲线右移。SSYX可以抑制大鼠心室肌细胞I_to峰值电流，加速通道时间依赖性失活，并促进通道的电压依赖性失活。SSYX可以抑制大鼠心室肌细胞I_K1的内向成分。SSYX可以抑制豚鼠心室肌细胞I_K电流，主要是作用于其慢激活成分I_Ks。SSYX对hERG通道的电流幅度，通道失活速度及通道失活后恢复速度无显著影响。SSYX对这些通道的综合作用可使得心肌细胞的除极幅度降低，动作电位时程和有效不应期延长，这可能是其产生抗心律失常作用的机制。同时这种多通道阻滞作用可能降低药物引发心律失常的风险，参松养心胶囊可能有广谱的抗心律失常作用。