雌激素通过细胞外信号调节激酶—钙蛋白酶—局部黏着斑激酶通路抑制乳腺癌细胞失巢凋亡

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目的本研究旨在观察17β-雌二醇(E2)对MCF-7乳腺癌细胞抗失巢凋亡能力的影响及钙激活蛋白酶(CANP)-局部黏着斑激酶(FAK)通路在其中的介导作用,探讨雌激素促进乳腺癌恶性进展的信号机制,为探寻乳腺癌的高效治疗方法提供实验依据.实验方法以雌激素受体(ER)阳性MCF-7乳腺癌细胞为研究模型(激素敏感性细胞MCF-10A,及激素非敏感性MDA-MB-231作为对照),聚甲基丙烯酸羟乙基酯(poly-Hema)涂层培养细胞诱导失巢凋亡,E2刺激及MEK和FAK抑制剂预处理细胞,通过蛋白印迹法观察蛋白表达变化及ERK和FAK磷酸化情况,MTT法及台盼蓝染色/细胞计数法检测细胞存活力,Hoechst荧光染色法检测细胞凋亡。实验结果1)E2增强MCF-7细胞抗失巢凋亡能力及ERK/FAK磷酸化。与细胞贴壁培养比较,poly-Hema悬浮培养可明显降低MCF-7细胞的存活率;以E2处理悬浮培养细胞24 h,发现E2可明显提高细胞存活率及减少细胞凋亡;E2还能提高细胞在细胞致死剂嘌呤霉素作用下的细胞存活力。此外,E2处理可增强模型细胞ERK和FAK的磷酸化。2)U0126及Calpeptin抑制E2诱导的ERK/FAK磷酸化及抗失巢凋亡效应。以E2处理模型MCF-7细胞12 h,发现以MEK抑制剂U0126预处理细胞,则E2诱导的ERK和FAK磷酸化均受到显著抑制,同时E2的抗失巢凋亡作用也明显减弱;采用CANP抑制剂预处理模型细胞可明显抑制ERK磷酸化及E2的抗失巢凋亡效应。3)乳腺肿瘤细胞CANP活性明显高于正常乳腺上皮细胞。MCF-7细胞在E2或表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)的作用下,其胞内CANP易于被激活,并可被CANP抑制剂阻断;在MBDA-MB-231,CANP对EGF刺激也很敏感。相反,MCF-10A细胞内CANP对E2或EGF刺激均不敏感。4)FAK抑制剂抑制E2诱导的ERK磷酸化及抗失巢凋亡效应。采用FAK抑制剂(FAK inhibitor,FI)预处理模型细胞,发现FI不仅可抑制FAK磷酸化,还可阻止ERK的磷酸化。FAK抑制剂可明显减弱E2的抗凋亡作用,使细胞存活率明显降低。结论1)雌激素能够明显提高乳腺癌MCF-7细胞的抗失巢凋亡能力;2)雌激素的抗失巢凋亡效应与激活胞内ERK/CANP/FAK信号通路活动有关;3)乳腺癌细胞CANP活性增高及CANP/FAK与ERK之间的正反馈环路可能增强乳腺癌细胞对雌激素刺激的反应性。
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