论文部分内容阅读
目的： 本课题采用利血平诱导的急性抑郁大鼠模型，研究电针刺激对抑郁症的治疗作用及可能的作用机制。旨在阐明电针刺激通过激活BDNF/TrkB信号通路，促进脑内神经发生发挥治疗抑郁症的作用。研究为传统疗法电针刺激治疗抑郁症的机制探索提供新的方向，为临床治疗提供思路和理论依据。 方法： 1．连续腹腔注射利血平（Respine,RESP,4mg/kg/d,i.p.3d）建立大鼠急性抑郁模型，通过悬尾、强迫游泳、旷场等行为学实验，评价利血平急性抑郁大鼠模型建立是否成功；电针（Electro-acupuncture,EA）连续治疗7d（EA预处理3d后给予利血平，最后一次EA后30min进行行为学测试），观察EA是否改善急性抑郁大鼠的抑郁样行为，经典抗抑郁药物—氟西汀（Fluoxetine,FLXT,20mg/kg/d,3d）治疗组为阳性对照组，同体积的生理盐水作为治疗的阴性对照。 2．采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine,BrdU,100mg/kg i.p.,3d）掺入法观察大鼠海马齿状回区（Dentate gyrus,DG）神经干细胞（Neural stem cell,NSC）增殖的变化，比较给予或不给予EA治疗对抑郁大鼠DG区NSC增殖的影响。 3．采用Western blot方法，检测各组大鼠海马中BDNF/TrkB信号通路相关蛋白BDNF、TrkB、p-ERK及p-CREB的表达水平，分析给予EA治疗是否影响抑郁大鼠中这些蛋白的表达。为进一步探讨EA是否通过BDNF/TrkB通路对利血平诱导的抑郁大鼠发挥抗抑郁作用，采用立体定向双侧侧脑室微量注射方法，给予TrkB受体拮抗剂GNF5837（1μg/μL,4μL/侧），观察GNF5837是否改变EA对BDNF/TrkB通路下游蛋白表达水平的影响。 4．为探究BDNF/TrkB信号通路是否通过影响NSC增殖参与EA抗抑郁的作用，掺入BrdU后分析GNF5837对EA促NSC增殖效应的影响，同时，评价GNF5837对急性抑郁大鼠的抑郁样行为的影响。 结果： 1.行为学检测结果显示，与正常组（Control）大鼠比较，在悬尾实验中，RESP组大鼠不动时间显著增加，不动的潜伏期显著降低，表现为抑郁样行为；强迫游泳实验中，观察到相似的结果，表明利血平急性抑郁大鼠模型建立成功。与RESP组相比，EA治疗后，大鼠的不动时间显著减少，提示EA治疗有改善抑郁样行为的作用。旷场实验中，与Control组比较，RESP组大鼠的自发活动的总路程和中央区域活动时间明显减少；与RESP组相比，EA（EA+RESP）治疗有效改善并增加了大鼠活动的总路程及中央区域活动时间；阳性对照FLXT治疗组有相似结果，EA治疗组与FLXT对照组无明显差异；结果显示EA治疗可改善抑郁大鼠的活动能力。 2.采用BrdU掺入后免疫荧光染色法分析NSC的增殖，结果显示，与Control组相比，RESP模型组大鼠海马DG区BrdU阳性标记NSC数目显著减少，提示RESP模型组中NSC增殖减少；与RESP组相比，EA治疗后，EA+RESP组大鼠DG区NSC的增殖显著增加；FLXT阳性对照治疗组有相似结果，EA+RESP组与FLXT+RESP阳性治疗对照组无明显差异。该结果提示EA具有促NSC增殖的作用。 3.Western blot结果表明，与Control组相比，RESP模型组大鼠海马BDNF、TrkB、p-ERK和p-CREB表达水平显著下调；与RESP组相比，EA治疗增加了EA+RESP组BDNF、TrkB、p-ERK和p-CREB表达水平；脑室内预先给予GNF5837，则取消EA刺激下升高的大鼠海马p-ERK和p-CREB表达水平，提示GNF5837抑制了EA的抗抑郁作用；GNF5837+RESP组大鼠海马p-ERK和p-CREB表达水平与RESP组无差异。结果表明GNF5837阻断了EA增加BDNF/TrkB通路蛋白表达水平的作用。 4.行为学检测结果显示，在悬尾实验和强迫游泳实验中，与EA+RESP组相比，预先给予GNF5837，可取消EA介导减少的大鼠不动时间，表明GNF5837取消了EA抗抑郁样表现的治疗作用。 5.采用BrdU掺入，进一步分析GNF5837对EA促NSC增殖的影响，结果显示，与EA+RESP组相比，GNF5837预处理取消EA治疗的促NSC增殖作用，提示GNF5837拮抗了EA的促增殖作用。 结论： 本研究证明，通过腹腔注射RESP成功建立大鼠急性抑郁模型；给予利血平大鼠EA治疗，可改善RESP大鼠的抑郁样行为。进一步的机制研究发现，EA通过激活BDNF/TrkB信号通路，改善急性抑郁大鼠受损的NSC，发挥抗抑郁治疗效果。因此，EA可能是通过BDNF/TrkB信号通路促进抑郁大鼠NSC增殖来发挥治疗急性抑郁症的作用。