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目的：研究RNA干扰(RNAi)真核表达载体对卵巢癌OVCAR3细胞系中胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)基因的抑制作用,评价RNA干扰技术对人卵巢癌OVCAR3细胞中IGF1R基因表达的阻断效应,为RNA干扰技术对卵巢癌的基因治疗提供理论依据。
方法:1、卵巢癌细胞系OVCAR3传代培养。2、构建三段靶序列针对IGF1R基因的RNA干扰质粒表达载体,采用脂质体法将其转染至卵巢癌OVCAR3细胞系。3、实验分组如下:Control组(未转染的OVCAR3细胞组);RNA干扰41组(转染质粒psihIGF1R-1组);RNA干扰2组(转染质粒psih IGF1R-2组)RNA干扰3组(转染质粒psihIGF1R-3组)。4、采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测IGFIR在mRNA及蛋白表达水平的变化。
结果:1、三组RNA干扰序列在卵巢癌OVCAR3细胞系中均抑制了IGF1R mRNA及蛋白的表达。2、与Control组相比,IGF1R mRNA表达水平显著下降,差异有非常显著性(p＜0.05)。3、Western Blot法检测三种干扰质粒在IGF1R蛋白水平的干扰效果,RNA干扰1组、RNA干扰2组、RNA干扰3组蛋白表达分别下降46.42％、11.83％、35.27％,差异具有显著性(p＜0.001)。4、Western blot法与PCR结果基本一致,三个干扰序列组相比,RNA干扰1组转染的IGF1R干扰序列对IGF1R mRNA与蛋白水平上抑制作用最强。
结论：RNA干扰技术能特异性有效沉默卵巢癌OVCAR3细胞系中胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)基因,下调卵巢癌OVCAR3细胞系中胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)基因的mRNA及蛋白表达水平,为卵巢癌的基因治疗研究提供了理论依据,以及为卵巢癌基因靶向治疗提供有力工具。