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鞘氨醇激酶1(Sphingosine Kinase1)SPK1是鞘磷脂代谢中的关键酶,参与了多种细胞生命活动。对SPK1的蛋白序列进行分析发现,其N-端含有一个保守的GKGK结构域,该结构域出现在多种发生乙酰化修饰的蛋白序列中,是一个公认的乙酰化修饰结构域,其中的K是发生乙酰化修饰的位点。据此,推断SPK1可能发生乙酰化修饰。首先,将Flag-SPK1转染到HEK293细胞,用Flag-M2珠子将SPK1沉淀下来,用抗ace-Lys抗体杂交,检测到乙酰化的SPK1。其次,沉淀产物与p300及乙酰CoA共同孵育后用抗ace-Lys抗体杂交,结果显示p300能增强SPK1的乙酰化。以上结果说明SPK1是一个乙酰化修饰蛋白,可被p300乙酰化。将SPK1蛋白GKGK结构域中的两个K均突变为R或Q,并转染HEK293细胞,经G418筛选后获得稳定表达野生型W-SPK1及突变体R-SPK1、Q-SPK1蛋白的细胞系。我们发现稳定表达W-SPK1的细胞检测到SPK1蛋白的乙酰化,而R-SPK1没有检测到乙酰化,揭示SPK1乙酰化发生在其GK结构域的K上。SPK1蛋白的这种翻译后修饰可能是其蛋白功能的一种重要的调控方式。实验结果表明,SPK1乙酰化修饰后其稳定性增强;将GKGK结构域中的两个K突变为R或Q,封闭了SPK1的泛素化修饰,避免了被蛋白酶体降解。细胞形态上,稳定表达Q-SPK1的细胞与表达W-SPK1及R-SPK1的细胞相比体积变大,但细胞生长速度变慢;流式分析细胞周期发现,稳定表达Q-SPK1的细胞处于S期的细胞明显增多,G2期的则减少,表明Q-SPK1阻断细胞由S期向G2/M期的进程。综上,SPK1乙酰化在调控细胞生长、大小及细胞周期中有重要作用。在体外实验基础上,以自发性2型糖尿病KK/Ay小鼠为动物模型,灌胃给予携带野生型及突变体spk1基因的减毒沙门氏菌,在动物整体水平评价SPK1乙酰化修饰对糖尿病动物血糖的调节作用。结果显示,口服携带Q-SPK1质粒的减毒沙门氏菌可以降低2型糖尿病小鼠KK/Ay的血糖,改善2型糖尿病小鼠的葡糖糖耐受能力。SPK1治疗3周后,Q-SPK1治疗组小鼠的体重明显减轻。Q-SPK1对2型糖尿病并发的多种脏器损伤如肝脏、胰腺等有较明显的保护作用。另外,采用糖尿病大鼠皮肤损伤模型,研究SPK1对糖尿病性皮肤溃疡的治疗作用。实验结果显示,SPK1对糖尿病皮肤损伤具有明显的促愈合作用。