割手密醛脱氢酶ScALDH基因克隆与表达分析

来源 :云南农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:tcwf2009
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甘蔗是我国最主要的糖料作物,也是重要的能源作物,在热带和亚热带都有种植,甘蔗的生长需要一定的环境条件,特别是对水分和温度要求较为严格。从水分角度来看,干旱影响甘蔗的出苗、发根、生长速率、糖分的积累,光合速率、生理变化等等。而我国蔗区85%以上分布在无灌溉条件的旱坡地,使甘蔗的生产受到影响。割手密(Saccharum spontaneum L.)是甘蔗属内的一个野生种,由于其具有良好的抗逆性,使之成为甘蔗远缘杂交育种的重要亲本。甘蔗传统的育种采用有性杂交的方法,但随着分子生物学发展,育种学家也开始转基因技术应用于甘蔗育种中。首先找到和克隆与抗逆性有关的基因,然后利用转基因技术导入甘蔗受体细胞,使其表达,提高甘蔗的抗逆性,增加产量。本研究从甘蔗细茎野生种(割手密,Saccharum spontaneum L.)中克隆抗旱相关的基因ScALDH,并研究其在干旱处理条件下的表达情况以及分析该序列的特征。为甘蔗抗旱育种及应用奠定基础。利用RT-PCR技术克隆甘蔗的ALDH基因片段,并对其核苷酸和氨基酸序列进行分析。使用NCBI Blastx、ORF find、Mega、NCBI Conserved Domain Search等程序对其分别进行不同物种氨基酸比较、开放阅读框(ORF)寻找、进化树及保守序列分析,并用Real Time-PCR分析所克隆基因在干旱胁迫前后的表达差异。结果表明:克隆出甘蔗的ALDH基因片段,总长度为1996bp,其中蛋白质编码区(CDS)全1524bp,编码508个氨基酸。与其它物种ALDH类蛋白氨基酸序列有很高的同源性,有ALDH家族的保守序列,并含有完整的开放阅读框,系统进化树分析显示与玉米的蛋白质亲缘关系最近。Real time-PCR数据表明,在干旱胁迫下,随着干旱时间的延长,该基因的表达量呈持续积累的表达模式。总体上来说,该基因对干旱胁迫显著表达。利用RT-PCR技术克隆的甘蔗ALDH基因,属于ALDH蛋白家族的一员,具有其典型的功能域,该基因在干旱胁迫过程中参与抗旱作用。该研究结果为野生种资源开发、优良抗旱亲本选择和培育抗旱性强甘蔗品种提供了参考依据。
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