骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种磷酸化的糖蛋白,能够与转移相关细胞表面的整联素受体α_vβ_v和CD44_v受体结合,介导恶性肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭。骨桥蛋白基因经过选择性剪接,产生N端存在差异的三种剪接突变体,即OPN-a、OPN-b和OPN-c。其中OPN-a是未发生选择性剪接产生的全长OPN,亚型OPN-b缺少外显子5,OPN-c缺少外显子4。随着研究的深入,发现OPN在多种恶性肿瘤细胞及组织中高水平表达,与恶性肿瘤的表型形成及转移的关系极为密切,并认为OPN可作为多种恶性肿瘤的诊断标志。然而,起始OPN表达介导肿瘤转移的上游分子机制尚不十分清楚,有待进一步的研究。Toll样受体是在进化上十分保守的一类跨膜受体,主要表达于免疫相关细胞及上皮细胞,通过识别病原相关模式分子(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),在机体先天免疫应答、组织修复及组织损伤引发炎症反应等过程中发挥着至关重要的作用。最初,TLRs被认为只表达于免疫相关细胞及上皮细胞,参与活化天然免疫应答和特异性免疫应答。近年来很多研究发现TLRs也稳定表达于多种肿瘤细胞表面,可能通过多种机制参与了肿瘤的发生及发展。目前大量的研究只关注TLRs与肿瘤形成的关系,然而亦有研究指出TLRs启动的炎症反应还参与形成肿瘤微环境,与肿瘤部位的免疫细胞浸润、良性肿瘤细胞恶性转化和转移等过程密切相关。Toll样受体信号引发炎症是调控肿瘤发生、演进的一个上游分子事件,OPN则作为一个发挥具体作用的功能分子介导肿瘤细胞转移。那么,TLRs信号与OPN两者之间是否存在一定的联系,TLRs能否调控OPN表达水平进而影响肿瘤转移呢?在以上研究背景和假设的基础上,我们在本研究中选取低转移卵巢癌细胞株HO-8910和从HO-8910分化而来的高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM为研究对象,首先在mRNA水平检测了TLR1-TLR9在两种肿瘤细胞中的表达。RT-PCR结果表明,除TLR1、TLR2和TLR8外,在两株细胞中均检测到其余6种TLRs mRNA表达。由于TLR4 mRNA在两株细胞株中均高水平稳定表达,故选取TLR4作为研究对象以LPS为TLR4激活剂,进一步探讨了TLR4信号通路对OPN表达水平以及肿瘤细胞增殖、转移及侵袭能力的影响。结果显示TLR4信号促进了肿瘤细胞增殖、转移和侵袭活力,与HO-8910相比HO-8910PM表现出更强的增值、转移及侵袭活力。利用实时荧光定量PCR技术与免疫印迹技术,我们发现LPS激活的TLR4信号上调三种OPN亚型及OPN-32kDa的表达,且HO-8910PM中OPN的表达水平显著地高于HO-8910,这暗示OPN高水平表达与肿瘤细胞恶性转化表型具有相关性。通过中和抗体封闭OPN后,由LPS刺激导致的细胞增殖、转移及侵袭活力等表型明显的得到缓解,印证了OPN在LPS促进肿瘤细胞增殖及转移过程中的重要作用。综合以上结果,我们认为TLR4信号通路上调OPN的表达可能是炎症促进肿瘤细胞转移的一条途径之一。另外,本文以低转移卵巢癌细胞株HO‐8910和高转移卵巢癌细胞株HO‐8910PM为研究对象,分别给予不同剂量的EGCG处理,通过检测细胞增殖活力确定EGCG的工作浓度为50μM,然后通过肿瘤细胞的软琼脂克隆形成、创口愈合和基质胶侵袭实验分别检测转移能力不同的两株卵巢癌细胞对照组和实验组中癌细胞增殖、转移及侵袭活力的变化,最后利用荧光定量PCR和ELISA实验技术在mRNA和蛋白水平上分别检测炎症因子IL‐8和TNF‐α及OPN的表达变化。实验结果证明,EGCG能显著抑制两株卵巢癌细胞的非锚定生长能力、迁移能力以及侵袭能力,且对HO‐8910PM的作用效果尤为显著;EGCG能显著下调HO‐8910PM细胞的IL‐8、TNF‐α及OPN‐c表达水平,HO‐8910虽有下调趋势但作用效果并不显著。综上所述,本研究以两株转移性不同人卵巢癌细胞为研究材料,检测了TLRs和OPN在两株细胞中的表达情况,在此基础上采用特异性TLRs激动剂激活TLRs信号,研究了TLRs信号变化对肿瘤细胞OPN表达及肿瘤转移的影响,并就EGCG对OPN表达影响及其抗癌机制进行了研究。本文探讨了Toll样受体信号、OPN在肿瘤细胞增殖、转移和侵袭过程中的相关性。为恶性肿瘤细胞发生、发展及转移机制的研究提供了理论基础,并对以Toll样受体和骨桥蛋白为联合靶位点的卵巢癌治疗方法提供了理论依据。