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目的：以探求二香定痛散复方配伍减毒中减轻川楝子致肝损伤的最佳药物或组合及其减毒机制为研究核心,观察二香定痛散及其配伍药物的急性毒性反应、亚急性毒性反应,研究其毒效关系,并对其减毒机制进行初步探讨,从而为进一步探求减轻川楝子毒性的中药复方配伍减毒规律奠定基础。
方法：
(1)二香定痛散全方及拆方对小鼠口服半数致死量(LD50)测定：取KM小鼠随机分组,分别单次灌服不同剂量二香定痛散全方及拆方药物,测定其LD50。
(2)二香定痛散全方及单味药对小鼠急性肝毒性的影响：取KM小鼠随机分组,单次灌胃给予蒸馏水及LD1剂量的二香定痛散、川楝子、小茴香、广木香,检测给药1h后血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性。
(3)小茴香和/或广木香与川楝子配伍对小鼠的急性肝毒性试验：选取昆明小鼠随机分组,单次灌服蒸馏水或川楝子(252g生药/kg)、川茴(265g生药/kg)、川广(265g生药/kg)、川广茴(265g生药/kg),检测给药1h后血清ALT、AST活性。
(4)小茴香和/或广木香与川楝子配伍对大鼠急性肝毒性试验：选取SD大鼠随机分组,单次灌服蒸馏水或川楝子(150g生药/kg)、川茴(157.5g生药/kg)、川广(157.5g生药/kg)、川广茴(157.5g生药/kg),检测给药2h后血清ALT、AST活性；计算肝脏指数；光镜下观察肝组织的病理变化。
(5)小茴香和/或广木香与川楝子配伍对大鼠急性肝毒性减毒机制的研究：测定各实验SD大鼠肝组织的SOD、MDA、计算SOD/MDA比值、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)。采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定肝组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)。以免疫组化法检测肝NF-κBp65及ICAM-1表达。
(6)小茴香和/或广木香与川楝子配伍减毒的亚急性毒性试验：选取SD大鼠随机分组,连续45d灌服蒸馏水或川楝子(150g生药/kg)、川茴(157.5g生药/kg)、川广(157.5g生药/kg)、川广茴(157.5g生药/kg),检测血清中.ALT、AST活性；计算肝脏指数；光镜下观察肝组织的病理变化。
(7)小茴香或柴胡与川楝子配伍对小鼠的急性肝毒性试验：取KM小鼠随机分组,单次灌胃给予蒸馏水或川楝子(180g生药/kg)、川茴(189g生药/kg)、川柴(189g生药/kg),检测给药1h后血清ALT、AST活性。
结果：
(1)二香定痛散全方及拆方对小鼠口服半数致死量(LD50)测定：二香定痛散的LD50:275 g生药/kg：川广的LD50:155 g生药/kg：川茴的LD50:315g生药/kg：广茴的LD50:259 g生药kg：川楝子的LD50:313 g生药/kg;广木香的LD50:89 g生药/kg：小茴香的LD50:171g生药/kg。
(2)二香定痛散全方及单味药对小鼠急性肝毒性的影响：给药1h后,与正常组相比,川楝子组的ALT、AST明显升高(P<0.01);小茴香、广木香组的ALT在正常范围内,AST稍有升高；二香组的ALT亦在正常范围内,但AST有所升高。各实验组与川楝子组比较,其ALT、AST均有显著降低(P<0.01)。
(3)小茴香和/或广木香与川楝子配伍对小鼠的急性肝毒性试验：与正常组相比,各实验组的ALT、AST及肝指数均升高,其中以川楝子组最高。与川楝子组相比,川茴组的ALT、AST及肝指数均明显降低(P<0.05或P<0.01);川广组的肝指数明显降低(P<0.01),ALT也有降低的趋势,AST无明显差异；川广茴组的ALT及肝指数明显降低(P<0.01),AST无明显差异。
(4)小茴香和/或广木香与川楝子配伍对大鼠急性肝毒性试验：与正常组相比,各给药组的ALT、AST及肝指数均明显升高(P<0.05或P<0.01),其中以川楝子组最高。与川楝子组相比,川茴组的ALT、AST均明显降低(P<0.01);川广组的ALT、AST无明显差异；川广茴组的AST明显降低(P<0.01),ALT有下降的趋势。
(5)小茴香和/或广木香与川楝子配伍对大鼠急性肝毒性减毒机制研究：与正常组相比,川楝子组的SOD/MDA及GSH-Px酶活性明显下降(P<0.05或P<0.01),TNF-α有升高的趋势,IL-6浓度明显上升(P<0.05),NF-κB、ICAM-1阳性表达明显增多(P<0.01)。与川楝组相比,川茴组的SOD/MDA明显升高(P<0.01),GSH-Px酶活性有升高的趋势,TNF-α、IL-6浓度有下降的趋势,NF-κB、ICAM-1阳性表达明显减少(P<0.01);川广组的SOD/MDA明显升高(P<0.01),TNF-α、IL-6浓度有下降的趋势,NF-κB、ICAM-1阳性表达明显减少(P<0.01);川广茴组的SOD/MDA及GSH-Px酶活性均明显升高(P<0.01或P<0.05),TNF-α有下降的趋势,IL-6浓度明显下降(P<0.05),NF-κB、ICAM-1阳性表达明显减少(P<0.01)。
(6)小茴香和/或广木香与川楝子配伍减毒亚急性毒性试验：与正常组相比,川楝子组的ALT及肝脏指数均明显上升(P<0.05或P<0.01)。与川楝组相比,各配伍组的ALT、AST及肝脏指数均无明显差异(P>0.05)。光镜下观察,各实验组均出现几例动物发生轻度脂肪变性、肝细胞点状坏死。各实验组间比较无明显差异。
(7)小茴香或柴胡与川楝子配伍对小鼠的急性肝毒性试验：与正常组相比,川楝子组的ALT、AST明显升高(P<0.01)。与川楝子相比,川茴组的ALT、AST明显下降(P<0.01或P<0.05);川柴组的ALT、AST仅有下降的趋势。
结论：实验结果显示给予252g/kg、150g/kg的川楝子后分别对小鼠、大鼠造成急性肝损伤,给予150g/kg的川楝子45d后对大鼠均无明显肝损伤。小茴香或广茴均可明显减轻川楝子引起急性肝损伤,广木香也有一定的作用。小茴香、广茴可能通过稳定细胞膜结构,加强组织修复,清除自由基,抑制脂质过氧化、抑制TNF-α、IL-6等炎症因子的表达,抑制NF-κB活性,抑制黏附因子的表达,从而对抗川楝子对大鼠急性肝组织的损伤。此外,研究显示小茴香与川楝子配伍对川楝子的减毒作用优于柴胡与川楝子配伍,这表明对川楝子的减毒作用中药寒温配伍较寒寒配伍为好。