板芩桔甘合剂对鸡传染性支气管炎治疗效果及其机理探究

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鸡传染性支气管炎是由于外感邪热入侵于肺,肺失宣发和肃降,临床主证为畏寒扎堆,饮水增加,甩头,流鼻涕,打喷嚏,双翅下垂,伴有咳嗽、呼吸急促、气管出现明显啰音等症状,宜清热解毒、宣肺止咳、祛痰散结。板芩据甘合剂(BQJGM)主要由石膏、知母、黄芩、板蓝根、桔梗、甘草等中药提取制成,具有清肺化痰、止咳平喘的功能。本试验通过对BQJGM在鸡胚上抗IBV-M41效果探究与人工建立感染IBV-M41雏鸡模型,探讨BQJGM对鸡传染性支气管炎的治疗效果及其作用机理,为BQJGM的开发使用提供一定的理论依据。第一,探究了BQJGM在鸡胚上抗IBV-M41效果。BQJGM在鸡胚上的安全浓度测定发现,每枚鸡胚注射0.2m L浓度为0.6g/m L BQJGM是安全的,无明显毒副作用;BQJGM在鸡胚上抗IBV-M41效果探究发现,BQJGM在鸡胚上具有抗IBV-M41的效果。第二,探究了BQJGM对人工感染IBV-M41雏鸡的治疗效果。采用Reed-Muench法计算出IBV-M41在鸡胚上的EID50;将120只雏鸡随机分为空白组(20只),造模组(100只),将造模成功的100只试验雏鸡随机分为模型组、阳性药物组,BQJGM高、中、低剂量组,除空白组、模型组外,试验各组连续饮水给药5d,2次/d。试验结束后计算各组雏鸡治愈率、有效率、采食量、日增重和料重比。治疗结束后分别每组选取5只雏鸡进行剖解,观察其病理变化,计算肝、心、脾、肺、肾、法氏囊的脏器指数;利用中性福尔马林对肝、心、脾、肺、肾、法氏囊等组织进行固定,H.E染色观察各脏器的组织学变化。结果显示,IBV-M41在鸡胚上的EID50为10-5.48/0.2m L;BQJGM高、中、低剂量组雏鸡的治愈率75.0%、80.0%、65.0%,有效率分别为90.0%、95.0%、80.0%。模型组雏鸡的料重比增加,空白组比较,差异极显著(P<0.01),BQJGM各剂量组雏鸡的料重比降低,与模型组相比,均差异极显著(P<0.01)。模型组雏鸡心、肝、脾、肾和法氏囊等脏器指数,与空白组比较,差异显著(P<0.05)。BQJGM中剂量组雏鸡的心、肝、脾、肺和肾等脏器指数,与模型组比较,均无显著性差异(P>0.05);BQJGM低剂量组雏鸡的心、肝、脾、肺和肾等脏器指数,与模型组比较,无显著性差异(P>0.05),BQJGM中剂量组雏鸡的法氏囊脏器指数增大,与模型组比较,差异极显著(P<0.01)。对病理组织切片观察发现,给药后,空白组各组织器官结构均正常,BQJGM高、中、低剂量组、阳性药物组雏鸡心、肝、脾、肺、肾、法氏囊等脏器病变情况有不同程度恢复,其中BQJGM高、中剂量组雏鸡心、肝、脾、肺、肾、法氏囊等脏器病变情况恢复效果最明显。第三,探究了BQJGM对人工感染IBV-M41雏鸡血清中IFN-γ、IL-6、IL-10含量的影响。ELISA法检测雏鸡血清中IFN-γ、IL-6、IL-10的含量。结果显示,在给药0天时,模型组雏鸡血清中IFN-γ含量降低,与空白组比较,差异不显著(P>0.05);在给药5天时,与模型组比较,BQJGM高、低剂量组、阳性药物组雏鸡血清中IFN-γ含量升高,其中BQJGM高剂量组雏鸡血清中IFN-γ含量,差异极显著(P<0.01);停药后2天,与模型组比较,BQJGM高、中、低剂量组和阳性药物组雏鸡血清中IFN-γ含量明显升高,差异极显著(P<0.01)。在给药0天时,模型组雏鸡血清中IL-6含量升高,与空白组比较,差异显著(P<0.05);在给药3、5天以及停药后2天,BQJGM高、中、低剂量组和阳性药物组雏鸡血清中IL-6含量明显降低,与模型组比较,差异显著(P<0.05)。在给药0天时,模型组雏鸡血清中IL-10含量降低,与空白组比较,差异显著(P<0.05);在给药3天,各给药组雏鸡血清中IL-10含量有所升高,与模型组比较,差异不显著(P>0.05);在给药5天,各给药组雏鸡血清中IL-10含量有所升高,与模型组比较,差异极显著(P<0.01);停药后2天,与模型组比较,各给药组雏鸡血清中IL-10含量有所升高,差异显著(P<0.05)。第四,探究了BQJGM对人工感染IBV-M41雏鸡支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA转录的影响。采用RT-PCR法检测BQJGM对人工感染IBV-M41雏鸡支气管中JAK、STAT1、IFN-αmRNA转录的影响。结果显示,模型组雏鸡支气管中JAK mRNA的转录量降低,与空白组比较,差异显著(P<0.05);阳性药物组雏鸡支气管中JAK mRNA的转录量升高,与模型组比较,差异显著(P<0.05);BQJGM各剂量组雏鸡支气管的JAK mRNA转录量均升高,BQJGM高剂量组雏鸡支气管中JAK mRNA转录量,与模型组比较,差异极显著(P<0.01),BQJGM中、低剂量组雏鸡支气管中JAK mRNA转录量,与模型组比较,差异显著(P<0.05);BQJGM高、中剂量组雏鸡支气管中JAK mRNA转录量,与阳性药物组比较,差异显著(P<0.05)。模型组雏鸡支气管中STAT1 mRNA的转录量降低,与空白组比较,差异显著(P<0.05);阳性药物组雏鸡支气管中STAT1 mRNA的转录量升高,与模型组比较,差异显著(P<0.05);BQJGM各剂量组雏鸡支气管的STAT1 mRNA转录量均升高,BQJGM高剂量组雏鸡支气管中STAT1 mRNA转录量,与模型组比较,差异极显著(P<0.01),BQJGM中、低剂量组雏鸡支气管中STAT1 mRNA转录量,与模型组比较,差异显著(P<0.05);BQJGM高、中剂量组雏鸡支气管中STAT1 mRNA转录量,与阳性药物组比较,差异显著(P<0.05)。模型组雏鸡支气管中IFN-αmRNA的转录量降低,与空白组比较,差异显著(P<0.05);阳性药物组雏鸡支气管中IFN-αmRNA的转录量升高,与模型组比较,差异显著(P<0.05);BQJGM各剂量组雏鸡支气管的IFN-αmRNA转录量均升高,BQJGM高剂量组雏鸡支气管中IFN-αmRNA转录量,与模型组比较,差异极显著(P<0.01),BQJGM中、低剂量组雏鸡支气管中IFN-αmRNA转录量,与模型组比较,差异显著(P<0.05);BQJGM高、中剂量组雏鸡支气管中IFN-αmRNA转录量,与阳性药物组比较,差异显著(P<0.05)。表明BQJGM可调节传染性支气管炎雏鸡支气管组织中IFN-α、JAK和STAT1 mRNA转录。综上所述,通过点眼滴鼻接种0.4ml 10~4EID50病毒鸡胚尿囊液能有效的使雏鸡发病,且不会出现死亡;BQJGM对人工感染IBV-M41雏鸡有较好的治疗效果,BQJGM能降低雏鸡血清中IL-6、IL-10含量和升高雏鸡血清中IFN-γ含量;升高雏鸡支气管组织中JAK、STAT1和IFN-αmRNA转录,推测BQJGM可通过干预JAK/STAT信号通路相关蛋白的表达,进而影响雏鸡机体内IFN-α的表达,以发挥BQJGM对人工感染IBV-M41雏鸡的治疗作用。
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