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本实验对HeLa细胞进行不同因子处理,首先测定最佳的应激处理条件,然后在确定应激条件的基础上,分别测定细胞HSP70表达、细胞增殖及凋亡情况,旨在探讨不同应激处理下HeLa细胞凋亡、增殖与HSP70表达的关系,以及HSP70影响凋亡的可能通路,以阐明其在细胞应激反应信号转导通路和细胞增殖与热应激调控中的作用与机制。本实验主要分为两部分:
一、不同热处理对HeLa细胞增殖、凋亡和HSP70表达的影响
通过对HeLa细胞不同温度下的热处理,观察不同温度处理后细胞活率、凋亡及HSP70表达的情况。结果表明,各实验组细胞均出现凋亡;45℃处理对细胞的抑制作用最强,表达HSP70量最高,43℃次之,41℃最低。41℃、43℃热处理HSP70表达高峰出现在24h;45℃热处理HSP70表达高峰出现在30h,此结果为进一步探讨HSP70蛋白对细胞生存、增殖及热耐受性的机制提供了依据。
二、激素、化学物质对HeLa细胞增殖、凋亡和热休克蛋白70表达的影响
本试验以地塞米松(dexamethasone,Dex)、吐温-80(Tween-80)、氨茶碱(Aminophylline)、乙二胺四乙酸(EDTA)、Ca2+、双氧水(H2O2)为应激源,旨在探讨不同应激处理下HeLa细胞凋亡、增殖及HSP70表达的特点和规律,以及HSP70可能的表达通路。结果表明,Dex(10-3~10-6mol/L)、Ca2+和H2O2剂量依赖性的抑制HeLa细胞增殖;Tween-80浓度在1﹪(v/v)和0.1﹪时对HeLa细胞增殖抑制差异极显著;EDTA浓度在10-2、10-3时对HeLa细胞增殖抑制作用较对照组差异极显著;Aminophylline对HeLa细胞增殖的影响不呈现剂量依赖性。HeLa细胞经应激处理后,除EDTA处理组未出现凋亡外,其余组均见DNA降解,形成梯形条带;各处理组HSP70表达较对照组有所提高,其中双氧水和氨茶碱处理组与对照组相比差异极显著,Dex和Tween-80处理组与对照组相比差异显著,EDTA和Ca2+处理组HSP70表达有升高趋势,但差异不显著。