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[目的]
通过检测正常大鼠及骨关节炎大鼠关节软骨YKL-40的表达情况,并检测反映软骨细胞去分化的Ⅲ型胶原、蛋白多糖表达及反映软骨细胞凋亡情况的软骨细胞凋亡率,探讨YKL-40在骨关节炎过程中与软骨细胞去分化及凋亡的关系,进而探讨YKL-40在骨关节炎发病过程中的意义。
[方法]
1.56例健康SD大鼠,随机分成7组,每组8例。随机切断SD大鼠一侧膝关节前交叉韧带,建立骨关节炎模型。
2.分别于手术当天,手术后2、4、8、12、16、20周随机处死1组大鼠,收集不同时间段手术侧关节软骨样本,行HE染色和番红O/固绿染色,并根据改良Mankin评分对骨关节炎样本进行病理分期。
3.免疫组化染色检测YKL-40、Ⅲ型胶原及蛋白多糖在各期OA关节软骨中的表达,根据平均光密度分析各指标的表达情况。
4.TUNEL法检测OA各期软骨细胞的凋亡,并计算软骨细胞的凋亡率。
5.分析YKL-40与Ⅲ型胶原、蛋白多糖、软骨细胞凋亡率在骨关节炎发病过程中的相关性。使用SPSS11.5软件统计分析数据,P<0.05表示差异有统计学意义。
[结果]
1.通过前交叉韧带切断建立的SD大鼠骨关节炎模型,其关节软骨形态学改变及病理学改变随时间推移逐渐加重(P<0.05)。术后不同时间段股骨髁上部比股骨髁下部关节软骨损伤严重(P<0.05)。
2.随着骨关节炎病情加重,YKL-40、Ⅲ型胶原表达均逐渐增多,蛋白多糖逐渐减少,软骨细胞凋亡率逐渐增高。在骨关节炎早、中、晚期,差别有统计学意义(P<0.05)。
3.YKL-40与软骨细胞凋亡率、Ⅲ型胶原表达呈正相关(P<0.05);YKL-40与蛋白多糖表达呈负相关(P<0.05)。
[结论]
1.前交叉韧带切断法可有效建立SD大鼠膝关节骨关节炎早、中、晚期模型。
2.随着骨关节炎病情加重,关节软骨细胞去分化增多,软骨细胞凋亡率增高。
3.YKL-40高表达与软骨细胞去分化和凋亡呈正相关,可能是关节软骨对局部退变过程的一种保护性反应。