流感病毒是引起人类呼吸道感染最常见的原因之一,临床表现为突然发高烧、咳嗽、头痛、萎靡、虚脱、上呼吸道和气管炎症。流感病毒感染宿主广泛,能够迅速传播,具有高致病率和高致死率,且可在不同物种间传播,严重危害人类和动物的生命健康及全球经济。为了预防和控制流感病毒感染,可采用疫苗和抗病毒药物。疫苗是预防流感的主要策略,但由于流感病毒的高度变异和疫苗研发的滞后性,限制了疫苗的使用。目前被允许用于抗甲型流感病毒的药物有两类:M2离子通道抑制剂(如:盐酸金刚烷胺和金刚乙胺)能够阻断M2离子通道的形成,然而流感病毒对该类药物已普遍具有严重的耐药性;神经氨酸酶抑制剂(如:奥司他韦和扎那米韦)干扰了NA蛋白的酶活力,但该类药物价格较贵。因此,亟需开发新的抗流感药物。中医中药用于防治流感已有悠久的历史,但由于中药成分十分复杂,其药效成分不明确、作用机制不清楚和疗效不稳定的缺点限制了期临床应用。从中药和天然产物中寻找抗病毒活性成分是研究开发抗流感病毒药物的重要途径。青蒿素是从复合花序植物黄花蒿茎叶中提取的有过氧基团的倍半萜内酯药物,青蒿琥酯和双氢青蒿素是青蒿素的衍生物,临床上青蒿素衍生物已被广泛用于治疗各种疟疾,并被报道具有抗肿瘤、抗炎和免疫调节等功能。但有关青蒿素类化合物抗流感病毒的研究还未见报道。本文利用A/Guangzhou/03/2009(panH1N1)流感病毒株感染人肺癌上皮细胞(A549),建立了体外流感病毒感染模型。利用终点稀释法测定H1N1病毒滴度,系统评价了青蒿琥酯和双氢青蒿素的体外抗流感病毒活性。此外,本文基于H1N1毒株细胞感染模型设计了一系列实验,初步探索了青蒿琥酯和双氢青蒿素抗流感病毒活性的作用机制,在病毒单复制周期内的不同时间点加药,通过终点稀释法检测药物在A549细胞中对流感病毒增值的影响,从而判断药物抑制病毒复制的哪一阶段;通过血凝抑制和神经氨酸酶活性抑制试验研究了药物对流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的影响。通过建立A/Guangzhou/03/2009(panH1N1)流感病毒感染BALB/c小鼠模型,利用小鼠存活率和体重变化等为指标,初步评价了青蒿琥酯的体内抗流感病毒活性。结果表明,青蒿琥酯和双氢青蒿素在5~1.25μg/mL的浓度范围对H1N1毒株在A549细胞中的增殖有持续性的抑制作用,并且呈现剂量依赖性。qRT-PCR试验结果显示两种药物均可以抑制流感病毒NP mRNA在A549细胞中的表达,间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹分析结果显示药物对流感病毒的NP蛋白具有抑制作用,病毒单复制周期的不同时间点加药试验结果表明,药物在病毒感染细胞后0~6 h内给药能够抑制流感病毒复制。然而血凝抑制试验表明,两种药物不影响流感病毒的吸附过程,神经氨酸酶活性抑制试验结果表明两种药物对流感病毒的神经氨酸酶活性没有抑制作用。青蒿琥酯(80 mg/kg/day、40 mg/kg/day)腹腔注射给药对感染H1N1流感病毒的小鼠具有显著的生命保护作用,具体表现为显著提高了感染小鼠的存活率和平均存活时间,并且抑制感染小鼠体重丢失。本文首次发现青蒿琥酯和双氢青蒿素有显著体外抗流感病毒活性,且青蒿琥酯具有体内抗流感病毒作用。本论文测定结果为临床抗疟疾药物青蒿琥酯和双氢青蒿素作为抗流感病毒药物的研究开发提高了初步而重要的实验依据。