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研究背景血栓闭塞性脉管炎（Thromboangitis obliterans,TAO）又称Buerger病,是一种常见的周围血管疾病。其病因复杂多样,如生活环境寒冷潮湿、吸烟、感染、自身免疫系统紊乱以及遗传等。各种因素致使人体内皮功能障碍,诱发血管内血栓与血管炎的发生,最终形成血栓闭塞性脉管炎疾病。血栓闭塞性脉管炎主要临床表现为肢体青紫冰冷,麻木不仁,拘挛疼痛,严重者出现跛行甚至坏疽。目前对于血栓闭塞性脉管炎的治疗方法一般分为手术治疗和保守治疗两种,因手术疗法对患者造成极大痛苦且愈后和转归并不理想,所以临床上一般以药物疗法为主。研究表明中药方剂血痹通具有祛风通络、破血逐瘀、息风止痉等功效,对血栓闭塞性脉管炎有一定的治疗效果,但其作用机制尚不明确。实验目的本课题将优化血痹通胶囊的制备方法并在动物模型中探究其对血栓闭塞性脉管炎的治疗效果,同时进一步研究血痹通胶囊的作用机制。实验方法本课题通过柱层析分离色谱、高效液相色谱、薄层色谱等方法对血痹通方药中的黄芪、丹参、赤芍、蜈蚣、地龙、土鳖虫、络石藤、橘红、钩藤9味中药的有效成分进行鉴定,并通过正交试验确定血痹通的最佳提取工艺。通过制粒辅料研究、浸膏粉与辅料配比研究、堆密度测定、质量检查、水分检测以及崩解时限等研究,优化血痹通胶囊的制备工艺。本研究利用H2O2诱导细胞凋亡,通过比色法检测含药物血痹通的大鼠血清对细胞存活率的影响,同时检测细胞内活性氧（Reactive oxygen species,ROS）、乳酸脱氢酶（Lactate degydrogenase,LDH）、谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二酮（Malondialdehyde,MDA）以及一氧化氮（Nitric oxide,NO）浓度,并通过蛋白质免疫印迹法（Western Blot,WB）检测eIF-2α、IRE-1α、cleaved caspase-3等蛋白表达情况。建立大鼠血栓闭塞性脉管炎模型,检测血痹通对模型大鼠的血小板粘附、血小板聚集和体外血栓形成的影响;采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定血痹通对大鼠血清中白细胞介素-6（IL-6）、C-反应蛋白（CRP）、内皮素-1（ET-1）、血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量的影响。实验结果以80%乙醇提取血痹通方药,加热回流提取2次,每次1 h为最佳提取工艺。按辅料糊精:药材=4:6的比例可以制作符合2015版《中药药典》要求的血痹通胶囊。与H2O2损伤对照组相比:（1）血痹通给药组血清对HUVEC细胞有一定的保护作用;（2）血痹通给药组血清能有效降低HUVEC细胞内ROS相对强度;（3）在HUVEC细胞中,含药物血痹通的大鼠血清可以抑制H2O2诱导的细胞凋亡,降低caspase-3、PARP、IRE-1α、eIF-2α的基因表达;（4）血痹通给药组血清能有效维持HUVEC细胞内GSH浓度;（5）血痹通给药组血清能有效降低HUVEC细胞内LDH浓度;（6）血痹通给药组血清能有效降低HUVEC细胞内MDA浓度;（7）血痹通给药组血清能有效维持HUVEC细胞内NO浓度;（8）血痹通给药组血清能有效维持HUVEC细胞内SOD浓度。与模型组比较:（1）血痹通高、低剂量组的大鼠病变等级较低;（2）血痹通高、低剂量组显著降低了大鼠血小板最大聚集率;（3）血痹通高、低剂量组显著降低了大鼠血小板黏附率;（4）血痹通高、低剂量组显著抑制了大鼠体外血栓的形成;（5）血痹通高、低剂量组能有效降低大鼠血清内TXB2含量以及TXB2与6-Keto-PGF1α的含量比值,并有效升高大鼠血清中6-Keto-PGF1α的含量;（6）血痹通高、低剂量组能有效降低大鼠血清内IL-6、CRP以及ET-1的含量。结论及意义经检验,优化提取方法后得到的中药方剂血痹通,包含方药中所有有效成分,并提升了部分有效成分含量。制成血痹通胶囊,其质量符合2015版《中药药典》中对胶囊类药物的要求。中药方剂血痹通能有效抑制血小板聚集、粘附和血栓的形成,具有溶栓和抗氧化作用。同时,血痹通可以调节血管内活性物质,对血管内皮细胞有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。