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目的:特发性膜性肾病(IMN)是最为常见的导致成人肾病综合征的原发性肾小球疾病,临床上表现为肾病综合征或大量蛋白尿。部分大量蛋白尿的患者可自发缓解,且肾功能稳定;近半数患者会出现肾功能改变甚至尿毒症。因此,对IMN发病机制的研究具有重要意义。微小RNA(miRNA)是一类长度在22~25个核苷酸的非编码小RNA,它通过调控转录及转录后加工水平的mRNA表达,参与人类三分之一的基因调控,是胚胎发育、细胞分化、血管形成、肿瘤发生等人体重要病理生理过程的基因调控因子,具有成为许多疾病早期诊断标志物和治疗靶点的潜在能力。近年来miRNA已经被广泛应用到了肾脏疾病的研究中。国外有研究发现在miRNA-193a转基因小鼠模型中miRNA-193a表达上调引起WT1表达降低,进而下调足细胞标志蛋白podocalyxin(PODXL)、nephrin(NPHS1)的基因表达,使足细胞骨架破坏,短时间内即出现局灶节段性肾小球硬化(FSGS)和大量蛋白尿。IMN与FSGS均属于足细胞病,病理上都存在足细胞骨架破坏及裂孔膜损伤,表现为大量蛋白尿。所以我们推测在IMN大量蛋白尿的患者中也存在miRNA-193a表达水平的升高,IMN缓解后miRNA-193a表达下降。在以往的研究过程中发现,尿液中外泌体(exosome)来源于泌尿系统各组织细胞,能够反映整个泌尿系统病理生理状态,并且具有无创获得,能抵御反复冻融,包裹的RNA未被降解,携带信息完整等优势。这使尿外泌体miRNA成为较理想的生物标志物来源,具有更高的研究价值。因此,本研究拟提取IMN患者尿外泌miRNA观察mi R-193a在IMN中的表达变化,为今后研究IMN发生、发展机制奠定基础。材料及方法:选取年龄、性别匹配的IMN肾病综合征患者、IMN缓解患者及正常对照各14例。分别留取清洁中段尿标本,离心去除细胞碎片及杂质后,利用Exoquick试剂盒方法分离纯化三组尿样本外泌体。向外泌体样本中加入植物性外源miR-168a作为内参基因,并用Trizol法提取尿外泌体中RNA,利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)对mi R-193a分子表达量进行测定。经软件分析得到miRNA的循环阈值(CT),采用2-△△CT法分析结果,以正常对照组2-△△CT为1作为基准校正。利用SPSS 19.0软件进行统计学分析。连续型变量均进行正态性检验,服从正态分布的连续性变量用(均数±标准差)表示,多组间均数比较采用单因素方差分析,组间比较采用卡方检验,P<0.05差异有统计学意义。结果:IMN肾病综合征组、IMN缓解组及正常对照组三组间尿外泌体miRNA-193a的表达存在差异,肾病综合征组及缓解组miRNA-193a的表达均明显高于正常对照组,相对表达倍数分别为6.07±0.72和2.54±0.43,P<0.05,差异有统计学意义。其中肾病综合征组与缓解组相比尿外泌体miRNA-193a表达明显升高,P<0.05,差异有统计学意义。结论:本研究证实,使用ExoQuick试剂盒法能分离出人体尿液外泌体;能够利用Trizol法提取出尿外泌体miRNA;IMN患者尿外泌体miRNA-193a表达显著高于正常对照组,并且随着疾病缓解表达下调。