论文部分内容阅读
垂体腺瘤(Pituitary adenoma)是临床上常见的上皮源性肿瘤,其发病率在颅内肿瘤的发病率中位于第三位。肿瘤的发生发展与机体的免疫状态密切相关,它是涉及了多基因,多阶段的相互作用的复杂变化过程。核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κ B)参与调控免疫、细胞增殖、炎症反应及凋亡等多种生理、病理过程,是以一种重要的核转录因子也是信号传导途径的中枢的角色参与其中的。在骨肉瘤中NF-κB可上调MHC-Ⅰ类链分子相关抗原A(MICA),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)等多种蛋白的表达进而参与骨肉瘤的发生发展。MHC-Ⅰ类链分子相关抗原A(MICA)作为非经典HLA 1类分子,在大多数上皮性肿瘤细胞的表面有特异性表达,MICA蛋白在体内具有两种存在形式,位于细胞膜表面的膜型MICA蛋白(mMICA)和被分泌入肿瘤微环境及血液中的分泌型MICA蛋白(sMICA). mMICA和NKG2D结合可对免疫系统产生正调节是免疫器官及免疫细胞对肿瘤细胞产生细胞毒性作用从而杀伤细胞,而sMICA与NKG2D结合对免疫系统产生负调节,抑制了NKG2D的表达,使免疫细胞的细胞毒性作用降低,还导致NK细胞分泌细胞因子的能力降低,对肿瘤的免疫逃逸起到一定作用。sMICA可以由基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)水解mMICA产生。MMP-9 (matrix metal loproteinase-9)是MMPs家族的一种重要明胶酶,是降解细胞外基质的关键酶,同时MMP-9参与MICA-NKG2D的肿瘤免疫逃逸过程。我们的研究第一次在垂体腺瘤中探讨NF-κB, MICA蛋白,基质金属蛋白9(MMP-9)的表达及相关联系,为研究NKG2D-MICA通路在垂体腺瘤的作用机制提供组织学基础。随机选取2008年2月～2014年8月滨州医学院附属医院40例石蜡包埋的泌乳素垂体腺瘤组织切片(男12例,女28例)和30例石蜡包埋的非功能性垂体腺瘤组织切片(男18例,女12例),另外收集组织学类型为泌乳素垂体腺瘤标本20例(男12例,女8例)和非功能性垂体腺瘤标本17例(9男8女)组织标本,术后病理证实确诊为垂体腺瘤的患者。我们还收集了来自滨州医学院附属医院正常脑组织15例。同时,我们收集了20例垂体腺瘤患者和20例健康人外周血血清。所有患者均没有免疫相关疾病,并没有使用免疫抑制药物。在这项研究中的患者获得许可并获得滨州医学院附属医院医学伦理委员会的同意。垂体腺瘤患者28～78岁,而年龄正常对照组25～68岁。用免疫组织化学染色的方法检测泌乳素型垂体腺瘤组织、无功能型垂体腺瘤组织及正常脑组织中NF-κB、MMP-9、MICA及p-NF-κB蛋白的表达情况；Western Blot方法检测泌乳素型垂体腺瘤组织、无功能型垂体腺瘤组织及正常脑组织中NF-κB、MMP-9、MICA及p-NF-κB蛋白的表达情况；ELISA方法检测泌乳素型垂体腺瘤患者、无功能型垂体腺瘤患者及健康人血清中sMICA和MMP-9的表达情况；Qrt-PCR的方法检测泌乳素型垂体腺瘤组织、无功能型垂体腺瘤组织及正常脑组织中NF-κb mRNA、MMP-9 mRNA、MICA mRNA的表达情况；通过Spearman相关系数检测NF-κB、 MMP-9、 MICA的相关性。泌乳素型垂体腺瘤组织、无功能型垂体腺瘤组织中NF-κB、 MMP-9、MICA及p-NF-κB蛋白的表达以及NF-κb mRNA、MMP-9 mRNA、MICA mRNA的表达明显高于正常脑组织,其差异具有统计学意义；泌乳素型垂体腺瘤患者、无功能型垂体腺瘤患者血清中sMICA和MMP-9含量明显高于健康人血清中的含量；Spearman相关分析显示NF-κB与MICA及MMP-9具有显著的正相关关系。本文证实了乳素型垂体腺瘤及无功能型垂体腺瘤组织中存在NF-κB、MMP-9、MICA及p-NF-κB蛋白的表达；外周血中sMICA、MMP-9水平明显升高,Spearman相关分析显示NF-κB与MICA及MMP-9具有明显的正相关关系。从而推测：在垂体腺瘤中,NF-κB的活化一方面促使MICA蛋白高表达,一方面诱导MMP-9高表达来水解MICA蛋白,使其脱落为sMICA,以促进肿瘤细胞的免疫逃逸。如何提高免疫效应细胞表面的NKG2D受体密度及提高肿瘤细胞表面MICA蛋白的表达,并且抑制MICA蛋白脱落形成sMICA成为避免肿瘤细胞免疫逃逸的一条新路径。本研究为NF-κB可能对垂体腺瘤中MICA蛋白的表达及脱落的调控作用这一设想提供组织学基础。