论文部分内容阅读
传统的蛋白质电泳分析都是在水相缓冲溶液中进行且规模很小。随着科研发展和实际需要,迫切需要半制备或制备型电泳以提高电泳规模,但同时由于一般需要加大电泳的电压或改变其它电泳条件,造成严重的“焦耳热”现象,温度升高,引起区带扩散,分辨率降低甚至蛋白质变性等结果,使得分离失去意义。这已成为了扩大电泳规模的瓶颈。一般有机溶剂的介电常数比水要小,在相同的电压下有机溶剂中的电流明显小于水溶液,从而有效的降低电泳中的电泳热,达到扩大电泳规模的目的。然而,蛋白质在有机溶剂中容易变性。要想在有机溶剂中进行电泳分离,如何保护蛋白质是面临的又一个挑战。论文研究了蛋白质非离子表面活性剂包衣和混合反胶束两种体系以降低蛋白质在有机介质中的变性,具有重要的理论意义和潜在的应用价值。论文首先合成了谷氨酸二脂肪醇酯核糖醇一系列非离子型表面活性剂,以脂肪酶、胃蛋白酶、溶菌酶为对象,运用正交试验对包衣过程和条件进行了系统地研究,综合考虑产率和活性等因素得到了优化的制备条件。以月桂醇和月桂酸在异辛烷中的酯化反应为模型测定了不同包衣脂肪酶的活性。讨论了离子种类和离子强度、pH值、有机溶剂、超声时间、表面活性剂种类、表面活性剂与酶的用量比率、冷藏时间等因素对包衣的影响。详细讨论了酶的包衣机理和酶促反应活性原理。其次,通过使用不同的非离子表面活性剂和AOT、CTAB进行复配,运用电导法研究了混合反胶束体系的微观结构和性质,通过增溶水量等指标发现AOT/Tween80和CTAB/Tween85是较为出色的混合反胶束体系。实验发现,表面活性剂的总浓度、离子型表面活性剂和非离子表面活性剂的摩尔比及缓冲溶液中盐的浓度等因素都会对混合反胶束的结构和性质产生影响。本文筛选出较合适的配比使混合反胶束体系的含水量和稳定性同时达到较大。以橄榄油在异辛烷中水解反应为模型研究了增溶酶的混合反胶束体系的性能,发现非离子表面活性剂的加入提高了酶活和酶的稳定性。原因是非离子表面活性剂分子降低了反胶束离子层的电荷密度,减弱了可导致酶变性的静电相互作用。本文最后研究了混合反胶束体系在高温下的稳定性。发现CTAB/Tween85/异辛烷/正戊醇体系在随温度升高的过程并未发生渗率现象,稳定性较好。