人胚神经干细胞分离培养鉴定及Musashi1蛋白的原核表达

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sophia115416
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神经干细胞是一类具有自我更新能力、高增殖潜能及多分化潜能的细胞,存在于胚胎和成年中枢神经系统脑室周围及其它区域.神经干细胞可被用于神经发育机制的研究、神经组织损伤的修复、神经退行性疾病的移植治疗以及作为基因治疗的细胞载体.神经干细胞的分离、培养和鉴定则是这些研究的重要基础.Musashil是一个种系发育保守的RNA结合蛋白,在无脊椎动物和脊椎动物中都有表达,其发挥调控作用的模式可能是通过在翻译水平抑制m-Numb基因,而激活Notch信号通道.Musashil能在中枢神经系统祖细胞(包括神经干细胞)内选择性表达,已经作为一种标志蛋白,被广泛用于神经干细胞的鉴定.本研究通过原代培养、自然筛选,从人胚脑组织成功分离、鉴定了神经干细胞,并完成了其传代培养,为进一步的干细胞移植研究准备了宝贵的干细胞资源.本研究还通过逆转录PCR反应,获取了完整的人Musashil蛋白的编码序列;将其克隆到表达载体后,成功纠正了编码序列中的错配碱基;将含正确编码序列的表达载体转化宿主菌,经诱导后大量表达目的蛋白,实现了人Musashil蛋白原核表达,获取的纯化的Musashil蛋白可用于进一步的抗体制备工作.
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