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猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductive and respiratory syndrome virus， PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型（PorcinecircovirusⅡ, PCV-2)、猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）、猪伪狂犬病病毒（porcinepseudorabies virus, PRV）、日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是引起猪繁殖障碍性疾病的重要病原，给养猪业造成了严重的经济损失。由于六种病毒常呈混合感染，增加了临床快速诊断的难度。目前，常规的诊断方法如病毒分离、血清学诊断方法等存在着耗时长、敏感度低的缺陷，已不能满足现实临床诊断需要。多重PCR方法具有敏感性高且可以一次检测多种病原的优势，更适于混合感染的快速诊断。本研究针对六种病毒的保守基因设计了特异性引物，建立能够同时检测猪六种常见病毒感染的多重PCR方法并初步应用于临床样品的检测。研究取得如下结果：1.检测CSFV、PRRSV和JEV感染的多重RT-PCR方法的建立及初步应用合成了三对特异性引物分别用于扩增CSFV C基因、PRRSV ORF6基因及JEV M-E基因。通过优化多重RT-PCR反应条件，建立了同时检测CSFV、PRRSV和JEV多重RT-PCR方法。多重RT-PCR特异性、敏感性及重复性试验结果显示，该检测方法敏感性达到pg级水平且特异性、重复性良好。使用该方法同时检测了52份临床病料，展示了该方法的应用前景。2.检测PCV-2、PPV和PRV三种DNA病毒感染的多重PCR方法建立根据GenBank收录的PCV-2、PPV和PRV的基因组序列，设计3对引物,分别用于扩增PCV-2ORF2基因、PPV NS1基因和PRV gB基因。通过优化多重PCR反应条件，建立了能够同时检测3种病毒混合感染的多重PCR检测方法。特异性试验表明，该方法可分别从PCV-2、PPV和PRV病毒及三种病毒混合物中扩增出大小分别为353bp、265bp、198bp的目的片段；敏感性试验表明，该多重PCR最低检测限达到pg级水平；应用该方法检测了39份临床病料，其中PCV-2阳性率达53.8%。3.猪六种常见病毒感染多重PCR检测方法的建立及应用在检测三种DNA病毒多重PCR方法及检测三种RNA病毒检测方法的基础上，通过优化多重PCR反应条件，建立了同时检测CSFV、PRRSV、JEV、PCV-2、PPV和PRV六种病毒感染的多重PCR方法，对该方法进行特异性、敏感性及重复性检测表明，该方法可一次性同时检出六种病毒，对其他病毒扩增结果呈阴性；最低检测限达到450pg且重复性良好。将该方法初步应用于39份临床样品检测，结果显示, PCV-2与PRRSV混合感染率达25.6%，推测PCV-2与PRRSV可能是引起母猪繁殖障碍的主要病原。