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本研究以酪氨酸酶的抑制活性为筛选指标,对50株虫生真菌的提取物进行了筛选,筛选出能够产生酪氨酸酶抑制剂的高活性菌株,并对高活性菌株提取物中活性组分进行了分离纯化和结构鉴定研究。对50株虫生真菌固体培养菌丝体甲醇提取物的筛选结果表明,供试虫生真菌各菌株提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用存在较大差异,其中古尼拟青霉各菌株均表现出相对较高的抑制活性。通过对7株古尼拟青霉菌株的固体培养菌丝体和液体培养发酵液甲醇提取物对酪氨酸酶抑制活性及对DPPH自由基的清除活性的比较分析,发现菌株RCEF0199的固体菌丝体提取物同时具有最强的酪氨酸酶抑制活性和对DPPH自由基的清除活性,因此,以该菌株作为高活性目标菌株进行进一步研究。实验通过比较菌株RCEF0199的菌丝体的不同溶剂提取物对酪氨酸酶的抑制活性及清除自由基活性,发现菌丝体的甲醇提取物活性最高。该提取物对酪氨酸酶二酚酶的半抑制浓度(IC50)为0.048mg/mL。抑制机制研究表明提取物对酪氨酸酶二酚酶的抑制机理属于可逆抑制,抑制类型为竞争性抑制,米氏常数(K_m)随提取物浓度的增大而增大,表明酶对底物的亲和力随着提取物浓度的增大而降低,提取物阻碍了酶与底物的结合,使得酶的催化活性降低。反应体系中不加入提取物时求得的米氏常数(K_m)为1.02mmol/L,根据直线斜率和K_m值求得最大反应速度(Vmax)为186.44U/min,求得提取物对游离酶的抑制常数(KI)为555.56μg/mL。以跟踪反应进程的方式测定样品对单酚酶反应迟滞时间和催化效率的影响,结果表明甲醇提取物对单酚酶活力的影响表现为延长反应迟滞时间,影响机制表现为提取物的自由基清除作用阻碍了反应的引发。菌丝甲醇提取物对DPPH自由基的清除活性的测定结果表明,随着提取物浓度的增加其自由基清除活性逐渐增强,当提取物浓度为1.0mg/ml时其清除率达到94.66%。实验采用半制备型色谱柱对提取物组分进行初步分离,以抑制酪氨酸酶活性和清除自由基活性为测定指标对分离组分进行了活性测定,确定出三种活性组分p-1、p-2、 p-3,这三种组分均同时具有抑制酪氨酸酶活性和清除自由基活性。实验进一步采用高速逆流色谱经两次分离成功制备出三种活性组分,第一次分离的溶剂体系为:正己烷:乙酸乙酯:甲醇:乙酸:水=3.5:5:3.5:0.15:5(V/V/V//V/V);第二次分离选择的溶剂体系为:正己烷:乙酸乙酯:甲醇:乙酸:水=2.5:5:2.5:0.15:5(V/V/V//V/V)。三种活性组分p-1、p-2、p-3纯度分别为91.7%、94.5%、96.8%,且组分p-1呈现为黄绿色粉末;组分p-2和p-3均呈现为黄色粉末。经LC-TOF-MS和NMR数据解析得知,化合物p-3的分子式为C15H12O6,,系统学名为:6,7,8,9-四羟基-3-甲氧基-4-甲基-1-芴酮;化合物p-1的分子式为C15H13NO5,系统学名为:6,7,8-三羟基-9-氨基-3-甲氧基-4-甲基-1-芴酮,为p-3的结构类似物,其9位羟基被氨基取代;化合物p-2的分子式为C15H10O6,推断系统学名为:1,6-二羟基-3-甲氧基-4-甲基-7,8,9-三芴酮,同为p-3的结构类似物。由天然产物数据库查询得知,三种化合物均为新化合物,属于芴酮类化合物,且同时具有较强的抑制酪氨酸酶活性和清除自由基活性,三种化合物均属首次发现且含量较高。