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放线菌作为大多数抗生素和一些活性物质的产生菌,也是开发天然除草活性物质的重要来源。因此本研究的主要目的是通过除草剂生测方法筛选出具有除草活性的菌株,并对除草活性菌株的生长代谢、稳定性、鉴定及培养条件4个方面进行了初步的研究。
从沈阳农业大学标本园、植物园、试验田及铁岭市农科院试验田等地土壤样本中分离出114株放线菌,通过蛋白核小球藻生长抑制试验和培养皿法杂草生长抑制试验两套筛子初筛,筛选出一株具有较强除草活性的菌株W10,该菌株对稗草的萌发抑制率,芽长抑制率和根长抑制率,分别为13.37%,41.91%和97.96%。结果表明该菌株对稗草的抑制作用主要表现为抑制根部生长。
通过植物生长抑制试验和温室盆栽杂革生长抑制试验,对初筛菌株W10的除草活性进行了进一步的验证,首先进行对毒素敏感的植物的生长抑制试验,W10菌株对4种生物学特性不同的单、双子叶植物表现出不同的抑制效果,这说明W10菌株的生物除草活性对高等植物具有一定的生理选择性;温室盆栽试验结果表明发酵上清液对水1∶1稀释时,对稗草的抑制效果较显著,萌发抑制率和根长的抑制均达到了50%以上,但对根的抑制率比培养皿法有所下降;1∶30稀释时对稗草抑制效果大幅下降,这说明除草活性物质对土壤复杂的环境因素比较敏感,而且按目前的发酵液配方和发酵条件对W10菌株进行发酵,所得发酵液中的除草活性物质含量很低,难以满足防治田间稗草的要求。
对除草活性菌株W10的生长代谢研究表明,菌株活性最高时正处在菌体生长的衰亡期,这说明除草活性物质主要是菌体的次级代谢产物,收获有效活性产物的时间应该在衰亡期即96h-108h。
对W10菌株的稳定性研究表明:菌株具有很好的传代稳定性,从菌体的培养特征及发酵液除草活性变化来考察菌株连续培养10代的传代稳定性,各代菌株仍表现与出发菌株相似的特征特性;菌株发酵液的热稳定性较差,80℃以上处理30min活性明显下降,110℃以上处理30min活性完全丧失;菌株发酵液的酸、碱稳定性较好,在酸性条件pH=3及碱性条件pH=10下处理,其除草活性与未经处理的发酵液相比均没有明显变化。
根据W10菌株的形态特征、培养特征以及生理生化特性对菌株分类地位进行了初步的鉴定,鉴定结果为:W10菌株为链霉菌属的灰色链霉菌的一个变种。
对W10菌株发酵培养基配方和发酵条件进行正交试验,结果表明:W10菌株的最佳发酵培养基配方为:丙三醇5.0%、酵母膏4.0%、(NH4)2SO41.0%、K2HPO40.06%;W10菌株的最佳培养条件为500mL三角瓶装液量60mL、接种量6%、pH值为7.5、液体种子种龄为40h。