目的：本课题应用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR技术检测玫瑰糠疹（pityriasis rosea，PR）患者外周血单个核细胞（the peripheral bloodmononuclear cells,PBMC）中TLR4、TLR9mRNA及其下游MyD88、TRIFmRNA的表达状况，从免疫角度探讨TOLL样受体在玫瑰糠疹发病机制中的意义。PR是一种临床常见的炎症性皮肤病，病程6-8周，具有自限性，其特征性表现是长轴与皮纹一致的圆形或椭圆形附有糠状鳞屑的玫瑰色、鲜红色或黄红色的斑疹或丘疹。PR的病因不明，发病机制尚不清楚，目前多认为与病毒感染和细胞免疫有关。机体在抵御病原体的入侵时有两套免疫防御机制：固有性免疫和适应性免疫[1]。固有性免疫是宿主防御的第一道防线。固有性免疫应答利用皮肤和粘膜上皮这两个物理屏障来避免感染并迅速作出应答。适应性免疫应答是由T和B细胞介导的相对较慢的过程，由于复杂的DNA重组使得其抗原受体高度多样化，因此它既能识别异常的抗原也能识别保守的抗原。固有性免疫通过病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）识别病原体，哺乳动物中负责识别PAMPs的受体称为模式识别受体（pattern recognition receptors，PRRs）。TOLL样受体（Toll-likereceptors，TLRS）是固有性免疫系统中一种重要的模式识别受体，它们完全是种系编码并以既定的形式表达于免疫和非免疫细胞[1]。TLRS是近年研究的一个热点，它们分布广泛，既可以表达于免疫细胞也可以表达于非免疫细胞，被认为是固有性免疫和适应性免疫的桥梁。当TLRS识别病原体后便可介导固有免疫的跨膜信号转导，并激活多种促炎症因子如IL-12、TNF-α，进而参与抗感染的炎症过程。此外，TLRS还可以通过细胞因子（如TNF-a、IL-1）、趋化因子（如IL-8、MIP2）、协同刺激分子（如CD-40、CD-80）和粘附分子（如ICAM-1）的产生[2-4]和上调抗原提呈细胞表面共刺激分子（如CD80/CD86）的表达，在固有免疫和适应性免疫应答中起调节作用[5、6]。其中TLR4主要分布于抗原提呈细胞，革兰阴性菌的细胞壁成分脂多糖是它的配体。TLR9表达于许多人类细胞，低甲基化的胞嘧啶磷酸鸟核苷酸（cytosine phosphate guanosine,CpG）DNA是它的配体，这种基序普遍存在于细菌及病毒的DNA中，但在哺乳动物中却极为罕见。TLRS依赖于胞浆外区的接头蛋白分子和激酶进行信号转导。据接头蛋白的不同分为MyD88(Myeloid differentiation factor-88，髓样分化因子88）依赖性途径和TRIF（Toll-IL-IR domain-containing adaptor-inducinginterferon-β，诱导干扰素β的含TIR结构域的衔接蛋白）依赖性途径。TLR4既可以通过MyD88依赖性途径也可以通过TRIF依赖性途径进行信号转导；TLR9仅通过MyD88依赖性途径进行信号转导。近年来，TLRS在皮肤炎症、皮肤恶性肿瘤和防御机制方面都有着重大进展。方法：病例组:26例玫瑰糠疹患者；对照组：20例健康人群。病例组：均来自河北医科大学第二医院皮肤科门诊，男12例，女14例，平均年龄：22.5岁，病程3天-1月，患者入选标准：⑴均有典型的临床表现：胸背部与皮纹长轴一致的黄红色圆形或椭圆形境界清楚的斑疹或丘疹；⑵受试前临床检查无其他免疫相关性疾病、过敏性疾病、肿瘤和其他严重系统性疾病；⑶1个月内无系统用药史，未服用免疫抑制剂、糖皮质激素及抗组胺药。对照组：20例均无过敏性疾病、自身免疫性疾病及家族史的健康人群，其性别、年龄与病例组经统计学分析，均无统计学差异。本研究采用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR技术检测病例组与对照组外周血单个核细胞中TLR4、TLR9及MyD88、TRIF mRNA的表达状况，实验数据应用SPSS13.0统计软件分析，以P＜0.05为有统计学意义。统计学方法选用的是正态性检验、秩和检验中的Mann-Whitney检验，定量数据用中位数或四分位数表示。结果：1TLR4的mRNA表达水平检测结果：经过正态性检验P＜0.1，不服从正态分布，结果用中位数或四分位数间距表示。病例组与正常对照组TLR4的mRNA表达水平的RQ值分别是8.102/11.87；7.275/4.96，采用秩和检验中的Mann-Whitney检验，二者在统计学上无显著性差异(P=0.09＞0.05)，所以尚不能认为两组TLR4的mRNA表达水平有差别。2TLR9的mRNA表达水平检测结果：经过正态性检验P＜0.1，不服从正态分布，结果用中位数或四分位数间距表示。病例组与正常对照组TLR9mRNA表达水平的RQ值分别是：1.592/3.86；3.13/8.93，采用Mann-Whitney检验，二者在统计学上有差异(P=0.03<0.05)。3MyD88的mRNA表达水平检测结果：经过正态性检验P＜0.1，不服从正态分布，结果用中位数或四分位数间距表示。病例组与正常对照组MyD88mRNA表达水平的RQ值分别是1.5005/1.445；1.7445/1.297，采用Mann-Whitney检验，二者在统计学上无显著性差异(P=0.36＞0.05)，所以尚不能认为两组MyD88的mRNA表达水平有差别。4TRIF的mRNA表达水平检测结果：经过正态性检验P＜0.1，不服从正态分布，结果用中位数或四分位数间距表示。病例组与正常对照组TLR4的mRNA表达水平的RQ值分别是3.0115/4.431；3.443/5.970，采用Mann-Whitney检验，二者在统计学上无显著性差异(P=0.23＞0.05)，所以尚不能认为两组TRIF的mRNA表达水平有差别。结论：1玫瑰糠疹患者外周血单个核细胞中的TLR4mRNA与TRIFmRNA表达水平与正常对照组相比均无统计学意义（P均>0.05），表明病例组与正常对照组TLR4mRNA与TRIF mRNA表达水平无差别，推测玫瑰糠疹的发病可能与革兰氏阴性菌感染无关。2玫瑰糠疹患者外周血单个核细胞中的TLR9mRNA表达水平与正常对照组相比有统计学意义（P <0.05），表明玫瑰糠疹患者外周血单个核细胞中的TLR9mRNA低于正常对照组，原因可能是机体存在某些特定DNA序列抑制了TLR9的表达。根据本研究结果推测TLR9可能参与了玫瑰糠疹的发病。3玫瑰糠疹患者外周血单个核细胞中的MyD88mRNA表达水平与正常对照组相比无统计学意义（P>0.05），表明玫瑰糠疹患者外周血单个核细胞中的MyD88mRNA表达水平与正常对照组相比无差别，可能的原因是MyD88依赖途径的上游不仅仅只有TLR9，多个TLRS均可以依赖MyD88依赖途径进行信号传导。