【摘 要】
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实验背景:放射治疗是临床上治疗癌症的主要方法之一,在中晚期癌症患者中,大多数都会接受放射治疗以治愈局部疾病、缓解症状或控制无法治愈的癌症。然而,在一小部分癌症中,如食管癌,放射治疗的效果仍然不尽人意,在放疗后的一段时间内癌细胞又迅速扩增甚至会进行远处转移,这使得食管癌是恶性程度最高的癌症之一,5年生存率往往不足20%。这种现象发生的机制是临床上亟需解决的问题。近年来,由细胞分泌的纳米级（30-15
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实验背景:放射治疗是临床上治疗癌症的主要方法之一,在中晚期癌症患者中,大多数都会接受放射治疗以治愈局部疾病、缓解症状或控制无法治愈的癌症。然而,在一小部分癌症中,如食管癌,放射治疗的效果仍然不尽人意,在放疗后的一段时间内癌细胞又迅速扩增甚至会进行远处转移,这使得食管癌是恶性程度最高的癌症之一,5年生存率往往不足20%。这种现象发生的机制是临床上亟需解决的问题。近年来,由细胞分泌的纳米级（30-150nm）囊泡——外泌体（Exosomes）——在肿瘤的诊断和治疗方面发挥着重要的作用,例如可以介导特定的micro RNAs（miRNAs）参与肿瘤的发生和发展等一系列生物学功能。研究目的:本课题从外泌体入手,以外泌体内miRNA为研究对象,寻找食管癌患者放射治疗前后其血浆外泌体中差异表达的miRNA,并在食管癌细胞水平上探究差异表达的miRNAs的功能与作用。实验方法:首先从患者血浆样本中分离纯化外泌体,其次运用多种方法鉴定外泌体的特征,如外观、尺寸、特异性蛋白等。然后从食管癌患者放射治疗前和放射治疗后的血浆外泌体中抽提RNA并进行建库测序,利用生物信息学分析出多个显著性差异表达的miRNAs,最后从差异表达的血浆外泌体miRNAs表达谱中选取了两个放射治疗后比放射治疗前显著性上调的miRNAs,分别为miRNA-484和miRNA-30a-3p以及两个显著下调的miRNAs,分别为miRNA-652-3p和miRNA-370-3p进行后续的功能研究。对TE-1细胞分别瞬时转染miRNA-484、miRNA-30a-3p、miRNA-652-3p、miRNA-370-3p的抑制剂和阴性对照物,构建食管癌细胞miRNA敲低体系,使用细胞划痕实验检测食管癌细胞的迁移作用,采用CCK-8试剂检测食管癌细胞的增殖活性,探索食管癌患者放射治疗前后血浆外泌体来源的miRNA-484、miRNA-30a-3p、miRNA-652-3p和miRNA-370-3p对食管癌细胞自身的生物学作用。实验结果:1.已成功构建TE-1细胞miRNA-484、miRNA-30a-3p、miRNA-652-3p和miRNA-370-3p敲低体系。2.miRNA-484、miRNA-30a-3p以及miRNA-370-3p均有显著抑制TE-1细胞的迁移作用,但增殖作用却不明显;miRNA-652-3p对TE-1细胞的迁移及增殖作用不能直接得出结论。说明食管癌患者经放射治疗后其循环外泌体通过上调miRNA-484、miRNA-30a-3p或下调miRNA-370-3p在细胞间进行信息传递,从而抑制或促进细胞的迁移作用,进而抑制或促进肿瘤的远处转移。
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