苹果免疫基因MdFLS2的克隆与拟南芥转化功能鉴定

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:otto0127
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新疆野苹果生长中国中亚天山山脉,是现在栽培苹果的祖先种,其遗传价值不断地被人们所重视。但近些年,新疆野苹果遗传多样性也同样面临着被破坏的危机,正因如此,对新疆野苹果种质资源和生物资源的开发利用迫在眉睫。  FLS2是植物免疫系统中的重要组分,与植物识别外来病原菌入侵,激活下游的抗病基因的表达,引发植物的MAPK级联放大反应和活性氧的爆发等一系列植物的抗病反应有关,在植物对病菌的应激反应中起着重要作用。虽然在拟南芥中FLS2功能机制的研究已经较为透彻,但是苹果由于自身基因的复杂性,许多针对FLS2在苹果上的研究尚在起始阶段,国内少见关于苹果上FLS2的研究。因此,在本次研究中,我们在新疆野苹果中克隆出了苹果中的FLS2基因,构建出相应的表达载体,并且得到了其转基因拟南芥植株,使用简单的统计学方法就MdFLS2在拟南芥中的异源表达状况,和一些在转基因拟南芥中出现的表型进行了一些研究。与此同时还构建了FLS2和BAK1激酶区域的原核表达载体,纯化得到了相应的蛋白,并取得了一些结论。为苹果中FLS2的功能和以后更深层次的工作奠定了基础。本研究的主要结果如下:  1.确定了新疆野苹果中 FLS2 的片段大小和相应的序列,并通过生物信息学分析了其蛋白质的结构区域,确定了FLS2各部分的功能。  2. MdFLS2于拟南芥中超表达,降低了拟南芥种子发芽率,拟南芥纯合子转化植株生长变缓。  3. 超表达MdFLS2部分恢复了拟南芥突变体FLS2对细菌鞭毛蛋白的敏感性。  4. 构建了相应的MdFLS2和MdBAK1激酶区域的原核表达载体,并且成功的诱导和纯化出了MdFLS2和MdBAK1激酶区域的蛋白,为以后的蛋白方面的实验打下了基础。
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