幽门螺杆菌UreB抗原与CTB在蚕蛹中的融合表达及免疫原性研究

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:destinyjack1983
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
幽门螺杆菌是慢性活动性胃炎、十二指肠溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的主要致病因素,目前的治疗手段主要是应用抗生素治疗的三联疗法和四联疗法,但是随着菌体抗生素抗性的增加,治愈率明显降低,免疫治疗可能是有效防治幽门螺杆菌感染最有前景的方法之一,幽门螺杆菌疫苗的研制已经成为目前研究的热点。家蚕生物反应器主要是利用家蚕杆状病毒表达系统表达外源蛋白,因其低成本、高表达量、产物天然性好而著称。本文旨在利用家蚕生物反应器表达CTB免疫佐剂和幽门螺杆菌UreB抗原融合蛋白,并对其免疫原性进行研究,为利用家蚕生物反应器低成本生产幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础。   首先,对重组杆状病毒BmNPV-UreB中ureB基因进行了序列测定,SDS-PAGE和Western blotting分析显示重组病毒在家蚕BmN细胞、幼虫和蚕蛹中能稳定表达;利用AKTA explorer10蛋白纯化系统对家蚕幼虫血淋巴中的UreB蛋白进行阴离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,经双向电泳进一步分离后进行了质谱鉴定。其次,采用原核表达系统表达了CTB蛋白,GM1亲和活性分析表明表达的CTB蛋白具有较好的GM1亲和活性,可以作为口服免疫佐剂。第三,利用Bac-to-Bac系统构建了重组病毒BmNPV-(CTB-Linker-UreB),对CTB和ureB基因进行了融合表达,SDS-PAGE和 Western blotting分析显示重组杆状病毒在家蚕BmN细胞和蚕蛹中成功表达;利用抗体亲和层析对蚕蛹表达的CTB-Linker-UreB融合蛋白进行了纯化并进行了质谱鉴定。最后,用蚕蛹表达的CTB-Linker-UreB融合蛋白灌胃ICR小鼠探讨了该融合蛋白的口服免疫原性。实验结果显示,融合蛋白能够明显诱导小鼠产生血清IgG,表明融合蛋白具有较好的免疫原性,可以作为生产幽门螺杆菌口服疫苗的候选抗原蛋白。
其他文献
琥珀酸是三羧酸循环的中间产物,同时也是微生物的代谢产物之一,作为一种重要的化工原料在医药、食品以及表面活性剂等行业有着广泛的用途。本文首先对琥珀酸产生菌S-1进行紫外线和亚硝基胍的复合诱变后,筛选出琥珀酸产量高,遗传性状稳定的菌株S-57,并对其进行激光诱变,筛选出菌株SH-24,相同发酵条件下琥珀酸产量达到21.25g/L,相对于未诱变菌株产量提高了343倍。然后根据丝状真菌的常用鉴定方法,通过
目的:炎症性肠炎病(IBD)是一种困扰人类多年的慢性肠道炎症性疾病,包括克罗恩式病(Crohn’s disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)。目前其发病机制尚未完全研究清