氰戊菊酯对小鼠繁殖机能及其继代效应的研究

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为了弄清楚氰戊菊酯(fenvalerate, Fen)对小鼠繁殖机能产生继代影响的剂量,本试验选取清洁型健康成年雄性昆明小鼠40只,随机分成对照组和不同剂量(0.5mg/kg-BW、10mg/kg-BW、100mg/kg·BW)处理组,连续灌胃小鼠7天。停止灌胃后,小鼠断颈采样。检测小鼠精子密度、精子活率、精子畸形率和顶体畸形率。分析小鼠睾丸显微结构和超显微结构的变化。抽提睾丸基因组DNA,检测Ig/2/H19印迹控制区甲基化的变化。为了研究Fen对小鼠繁殖机能的继代效应,选取成年雄性昆明小鼠11只,用Fen10mg/kg·BW连续灌胃40天,随后将雄鼠与健康成年雌鼠进行交配得到G1代。G1代性成熟后,随机选取G1代雌雄各40只和健康小鼠(对照)进行分组配种:对照组♂×对照组♀(组Ⅰ,对照组)、对照组♂×G1♀(组Ⅱ)、G1♂×对照组♀(组Ⅲ)、G1♂xG1♀(组Ⅳ),得到G2代。分别在G1和G2代小鼠60日龄时进行采样,分析(1)G1代雌鼠的子宫、卵巢组织结构、血清中孕酮和雌二醇的含量;(2)G1代雄鼠血清中睾酮和雌二醇的含量;(3)G2代雌鼠发情间期子宫、卵巢组织结构的变化以及血清中孕酮和雌二醇的变化。1. Fen对雄性小鼠繁殖机能的影响Fen对小鼠精液质量有不良影响,各处理组小鼠精子密度显著低于对照组(P<0.01),其中10mg/kg·BW组和100mg/kg·BW组显著低于0.5mg/kg·BW组(P<0.05);各处理组精子活率极显著低于对照组(P<0.01),其中100mg/kg·BW组极显著低于0.5mg/kg·BW组和10mg/kg·BW组(P<0.01);各处理组精子畸形率极显著高于对照组(P<0.01);10mg/kg·BW组和100mg/kg·BW组精子顶体畸形率极显著高于0.5mg/kg·BW组和对照组(P<0.01)。10mg/kg·BW和100mg/kg·BW组睾丸曲细精管中生精细胞数量和精子数量显著少于0.5mg/kg·BW组和对照组(P<0.01),0.5mg/kg·BW组和对照组之间差异不显著;Fen处理使睾丸曲细精管生精细胞脱落,10mg/kg·BW合100mg/kg·BW组睾丸曲细精管生精细胞脱落比例显著高于0.5mg/kg·BW组和对照组(P<0.05),0.5mg/kg·BW组和对照组之间差异不显著;100mg/kg·BW组睾丸间质细胞数量显著少于其它各组(P<0.05),其它各组之间差异不显著。电镜分析表明各处理组小鼠睾丸的支持细胞中的线粒体出现肿胀和空泡化现象,内质网扩张、肿胀,溶酶体增多,并且这种现象,随着Fen剂量扩大,严重程度增加。2.G1代小鼠性腺组织学分析和性腺激素分析G1代雌鼠发情期粘膜上皮厚度极显著高于对照组(P<0.01),子宫内膜厚度与对照组相比差异不显著,卵巢黄体面积、原始卵泡数、初级卵泡数、次级卵泡数、成熟卵泡数、闭锁卵泡数与对照组相比差异不显著。G1代雌鼠发情间期卵巢黄体面积极显著高于对照组(P<0.01),子宫粘膜上皮厚度、子宫内膜厚度、原始卵泡数、初级卵泡数、次级卵泡数、成熟卵泡数、闭锁卵泡数与对照组相比差异不显著。激素分析表明,G1代雌鼠发情期血清孕酮含量显著低于对照组(P<0.05),雌二醇含量显著高于对照组(P<0.05)。发情间期血清孕酮含量极显著高于对照组(P<0.01),雌二醇含量与对照组相比差异不显著。G1代雄鼠血清睾酮含量显著高于对照组(P<0.05),雌二醇含量极显著高于对照组(P<0.01)。3.G2代小鼠性腺组织学分析和性腺激素分析G2代雌鼠子宫、卵巢组织结构分析表明,组Ⅳ小鼠发情间期子宫粘膜上皮厚度显著高于其它各组(P<0.05),其它各组之间差异不显著,而子宫内膜厚度、黄体面积、原始卵泡数、初级卵泡数、次级卵泡数、成熟卵泡数、闭锁卵泡数各组之间差异不显著。激素分析表明,G2代小鼠发情间期组Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ血清中孕酮含量显著低于对照组(P<0.05),组Ⅱ和组Ⅲ的孕酮含量显著高于组Ⅳ(P<0.05),组Ⅳ血清雌二醇含量显著高于其它各组(P<0.05)。4.Igf2/H19印迹控制区甲基化的分析0.5mg/kg·BW、10mg/kg·BW和100mg/kg·BW组Igf2/H19印迹控制区CpG位点甲基化率显著高于对照组(P<0.05),但是0.5mg/kg·BW组、10mg/kg·BW组和100mg/kg·BW组之间差异不显著。以上研究结果表明:(1)氰戊菊酯对成年雄性小鼠精液质量有不良影响,并且这种影响呈剂量依赖性;(2)氰戊菊酯对成年雄性繁殖性能的不良影响可以传递到后代,导致雌性后代性腺组织结构变异、性周期异常、激素分泌异常,雄性后代激素分泌异常,并且这种现象至少可持续到G2代;(3)氰戊菊酯导致成年雄性小鼠基因组DNA Igf2/H19印迹控制区CpG位点甲基化率提高。
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