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肝癌是我国高发性恶性肿瘤,分布广,转移率高,但其发生的分子机制尚不明确。本文选择信号转导及转录活化因子(signal transducers and activators of transcription)STAT3及Wnt信号转导途径中的信号分子β-catenin和TCF4作为研究对象,研究了STAT3、β-catenin和TCF4在肝癌中的异常表达及其在肝癌细胞生长迁移中的作用,试图在细胞水平上寻找治疗肝癌的方法。 1.STAT3对肝癌细胞迁移的抑制作用 为研究STAT3在人肝癌细胞生物学行为中的作用,通过优势负性突变(dominant negative)策略造成肝癌细胞中STAT3缺陷,并利用过表达STAT3造成异常活化,发现STAT3介导了白细胞介素-6(IL-6)对肝癌细胞迁移的抑制。并发现肝癌细胞BEL-7402中存在磷酸化STAT3的组成性活性。 2.肝癌细胞中Wnt异常信号转导途径对细胞增殖及迁移的影响 本文采用免疫组化、RT-PCR及Western Blot检测的方法,调查了β-catenin蛋白在中国人肝细胞癌组织及肝癌细胞BEL-7402中的异常高表达。并首次发现TCF4 mRNA在肝癌细胞BEL-7402中存在高表达。利用TOP荧光素酶报告质粒检测了肝癌细胞中Wnt途径信号传递的异常增强。提示我们在肝癌发生中异常Wnt信号途径可能起到极其重要的作用,TCF4在肝癌细胞中强表达可能是肝癌中Wnt途径异常活化的主要原因。为了证实β-catenin和TCF4在肝癌细胞Wnt信号途径异常活化中的作用,本文采用β-catenin突变型β-catenin S37A造成β-catenin异常活化,及利用Dominant negative TCF4阻断Wnt信号途径,发现β-cateninS37A可明显刺激肝癌细胞生长,而Dominant negative TCF4对肝癌细胞BEL-7402的增殖和迁移有明显抑制作用,并证实异常Wnt信号途径是通过cyclinD1来影响肝癌细胞增殖的。说明特异性的破坏TCF4和β-catenin形成的复合物以阻断Wnt信号通路,对于抑制肝癌细胞生长和迁移是行之有效的。本文为今后利用阻断Wnt信号通路来探索治疗肝癌的方法打下了基础。 博士学位论文3.STAT3与卜catcnin的相互关系研究 STAT3信号转导途径与p{atenin的信号转导途径很有可能存在着一定的内在联系。我们在肝癌细胞HepGZ中发现STAT3可以和p{atenin发生免疫共沉淀,并且此免疫沉淀物含量随着细胞密度的增加而减少。STAT3和p-catenin都是转录激活因子,但我们在研究STAT3对p-catenin转录活性的影响中尚未发现可喜的结果。4.中国家蚕抗菌肽基因在杆状病毒表达系统中的表达 抗菌肽是一类具有分子量小,无免疫原性,抗菌谱广等特点的抗菌多肽,有望成为新一代的抗菌、抗癌药物。本文对中国家蚕抗菌肽的天然基因及人工改造基因在 Bac to Bac杆状病毒表达系统中进行了表达,得到了有活性的抗菌肽。通过实验认为C-术端酚氨化对抗菌肽的抗菌活性很重要。本文为进一步探讨抗菌肽的抗菌抗癌机理提供了理想的材料。