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[目的]了解深圳市人民医院金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,SA)的耐药现状和医院感染状况,通过耐药谱分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和mecA基因相关高变区聚合酶链反应(HVR-PCR)分型对金黄色葡萄球菌进行对比分型研究,以寻找一种最佳的分型技术;利用PFGE和HVR-PCR分型技术建立金黄色葡萄球菌电泳图谱库,确定菌株之间的相关性及感染流行情况,为减少和控制医院感染提供参考。
[方法]1.金黄色葡萄球菌临床菌株的收集通过回顾性分析,收集深圳市人民医院2004年6月~2005年4月期间住院患者经分离鉴定的金黄色葡萄球菌菌株,同一患者前后分离到的相同金黄色葡萄球菌只取首次菌株。
2.耐药谱分型和医院感染分析按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)2004年标准,应用纸片扩散(K-B)法检测金黄色葡萄球菌对18种临床常用抗生素耐药情况。根据药敏结果初步将金黄色葡萄球菌分为甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并依据药敏结果对MRSA和MSSA作进一步分型;结合病历确定其是否为医院感染菌株,比较MRSA和MSSA在医院感染中的流行特征。
3.PFGE分型所有菌株经过溶菌、去蛋白、酶切等处理后,在BIO-RADGenePathTM系统中电泳,经溴化乙啶染色,通过GelDoc2000凝胶成像系统成像,结合FingerprintingⅡ软件对金黄色葡萄球菌进行基因同源性分型分析,将MRSA和MSSA分型结果与耐药谱分型结果分别进行对比分析。
4.mecA基因相关高变区聚合酶链反应(HVR-PCR)分型提取金黄色葡萄球菌核酸,设计MRSA中HVR特异性引物,检测MRSA高变区片段长度或直接重复单元(DRUs)数目,依据DRUs数目确定其型别。将HVR-PCR分型结果与MRSA的耐药谱分型结果、PFGE分型结果分别进行比较分析。
[结果]1.51株金黄色葡萄球菌经头孢西丁药敏试验分成23株MSSA和28株MRSA。
2.51株金黄色葡萄球菌中有16株为社区感染菌,35株为医院感染菌。
3.通过耐药谱分型将23株MSSA分成11个型,28株MRSA分成7个型。
4.通过PFGE分型将20株MSSA分成16个型,27株MRSA分成12个型,MSSA耐药谱分型结果和PFGE分型结果并不一致;MRSA耐药谱分型结果和PFGE分型结果亦不存在一致性。
5.通过HVR-PCR分型将28株MRSA分成10个型,HVR-PCR分型结果和MRSA的耐药谱分型结果并不一致;但和PFGE分型结果有部分相符。
[结论]1.传统耐药谱分型适用于一般医疗机构,指导临床用药。
2.MRSA引起的医院感染在金黄色葡萄球菌感染中占主导地位,并存在由同一MRSA菌株引起的医院感染流行。
3.PEFG分型方法适用于大量MRSA和所有金黄色葡萄球菌的分型和流行现状分析。
4.HVR-PCR分型方法分型快速,重复性好,但只适合对院内较少量MRSA菌株进行分型研究。
5.表型分型和基因分型之间并不一致;两种基因分型方法结果有部分相符。