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目的通过将携带有柠檬醛的载体微珠植入到正常发育的20期鸡胚右侧的鼻窝外胚层组织上,局部诱发鸡胚唇裂畸形,检测柠檬醛对鸡胚唇部组织BAMBI时空表达的影响,探讨并阐明BAMBI对鸡胚唇部组织发育及唇畸形缺损形成过程中的作用,为进一步探索人类唇部发育和唇裂的发生机制奠定基础,为人类唇裂的早期发现及早期治疗提供理论依据。方法1、建立稳定的鸡胚唇裂模型通过本课题组的前期摸索,柠檬醛诱发畸形的最佳浓度为0.6g/ml,已经成功建立了稳定的鸡胚唇裂动物模型。本研究同样运用0.6g/m1的柠檬醛浓度,将携带有最佳浓度柠檬醛的载体微珠植入到正常发育的20期鸡胚右侧的鼻窝外胚层组织上,复制稳定的鸡胚唇裂动物模型。2、地高辛标记鸡胚BAMBI基因RNA探针的制备将孵化至24期的新鲜鸡胚取出,提总RNA,用RT-PCR的方法得到BAMBI的cDNA,将回收的cDNA插入到PGEM-T质粒载体中,得到携带有BAMBI的PGEM-T重组质粒,用限制性内切酶将重组质粒线性化,利用质粒上的SP6和T7启动子,在SP6RNA聚合酶和T7聚合酶的作用下,分别体外转录合成地高辛标记的BAMBI基因的RNA反义探针和正义探针。3、整胚原位杂交检测柠檬醛对鸡胚唇部组织BAMBI时空表达的影响将180只正常发育的20期鸡胚随机分成正常空白组、DMSO阴性对照组、反义探针实验组和正义探针实验组4组,每组40只。正常空白组：同期正常发育未经任何处理的鸡胚；DMSO阴性对照组：植入携带有DMSO的微珠；反义探针实验组：植入携带有最佳浓度柠檬醛的微珠；正义探针实验组：植入携带有最佳浓度柠檬醛的微珠。上述各组经处理后,继续孵化至21、22、23、24、25、26、27、28期,每期采集5个标本,用整胚原位杂交的方法检测BAMBI在面部组织的时空表达变化。其中,正常空白组、DMSO阴性对照组、反义探针实验组用BAMBI反义探针检测,正义探针实验组用BAMBI正义探针检测。结果1、稳定的鸡胚唇裂模型建立结果：根据本课题组的前期摸索,利用0.6g/m1的柠檬醛浓度,成功复制了稳定的鸡胚唇裂动物模型。2、鸡胚BAMBI基因RNA探针的制备结果：成功构建了BAMBI/PGEM-T重组质粒,并通过体外转录得到了正义和反义的RNA探针。此RNA探针长858bp,正义探针与BAMBI的mRNA碱基序列相同,反义探针与BAMBI的mRNA碱基序列互补,并带有地高辛标记。3、整胚原位杂交结果：正常空白组、DMSO阴性对照组和反义探针实验组成功检测到BAMBI的时空表达变化,正义探针组未能检测到BAMBI的表达。其中,BAMBI在鸡胚的额鼻突、侧鼻突、上颌突和下颌突均有表达。反义探针组较空白组、DMSO组BAMBI同期表达水平低,反义探针组处理侧较未处理侧BAMBI表达水平低。结论本研究表明,利用柠檬醛可诱发鸡胚唇部发育畸形,柠檬醛可抑制BAMBI的表达,影响鸡胚唇部的发育,提示BAMBI在鸡胚唇部正常发育及唇畸形发生过程中具有重要的作用。