人类KRAS基因第12,13及61位密码子突变与晚期转移性结直肠癌患者接受EGFR单抗类药物的疗效密切相关。大量临床研究结果表明,只有KRAS基因野生型的晚期转移性结直肠癌患者可以从EGFR单抗类药物的治疗中受益,而携带突变型KRAS基因的患者对该类药物的应答率很低。通过对结直肠癌患者KRAS基因热点突变进行检测,可以帮助医生选择适宜接受EGFR单抗类药物治疗的人群,同时降低了因不适当用药造成不良反应的风险。因此,为了满足临床上检测KRAS突变的需求,建立一种操作简便,灵敏度高且稳定性好的检测方法至关重要。目前已有多种实验室及商品化检测该突变的方法,但其中多数方法操作繁琐或是成本很高,难以应用于临床。本研究建立并优化了一种基于荧光探针熔解曲线技术检测KRAS基因热点突变的方法,该方法操作简便,结果判读容易,且灵敏度高,抗干扰性强,同时可以达到较高的通量,适宜在临床检测中应用。利用本研究建立的方法,我们检测了15例临床石蜡包埋结直肠癌样本及21例冻存结直肠癌样本的KRAS基因突变情况,并使用CFDA批准的商品化试剂盒对所有样本进行验证。所有样本由本研究建立方法得到检测结果与商品化试剂盒得到的检测结果完全一致。通过与焦磷酸测序进行比较,本方法表现多项优于焦磷酸测序的特质。