高寒植物中不同分子量单宁对牦牛体外瘤胃发酵甲烷产量的影响

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本论文包括三部分实验。第一部分是筛选青藏高原缩合单宁(CTs)含量较高的植物。主要是采集天祝乌鞘岭地区8-10月份的5种高寒草甸植物(金露梅、珠芽蓼、藏沙棘、高山柳和高山绣线菊),采用Folin-Ciocalteu法和丁醇-盐酸法测定其中的总单宁和缩合单宁含量,筛选出缩合单宁含量最高的样品。在第二部分实验中,纯化和分离缩合单宁,采用排阻色谱法将各植物所含纯化缩合单宁按分子量从小到大分成5组(Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ)。然后采用凝胶渗透色谱法(GPC)测定各植物缩合单宁不同组分的分子量大小。第三部分试验是以燕麦干草为底物,添加从5种植物纯化提取的缩合单宁以及不同分子量的各组分缩合单宁,利用牦牛瘤胃液进行体外发酵试验,并测定发酵液总产气量、甲烷产量、pH值、氨态氮含量,以及残渣的干物质和中性洗涤纤维降解率。观测不同分子量大小的缩合单宁对瘤胃发酵参数和甲烷产量的影响,并结合发酵参数推断其参与瘤胃发酵的反应过程,进一步探究缩合单宁参与瘤胃生态环境调控的作用机理。试验结果如下:1、金露梅、珠芽蓼、藏沙棘、高山柳和高山绣线菊是富含单宁以及缩合单宁的高寒植物,在8、9、10月中8月份单宁含量较高,且随着月份推移含量降低,各月份之间含量差异显著(P<0.05)。缩合单宁含量最高(4.79%DM)的是9月份的藏沙棘,最低者为10月份的高山绣线菊(1.18%DM)。根据5种植物总单宁和缩合单宁含量确定其8月份样品进行下一步分析实验。2、不同植物样品提取的纯化缩合单宁之数均分子量间差异显著(P<0.05)。其中,金露梅样品的纯化缩合单宁数均分子量(1926.5Da)和重均分子量(4081.6Da)最大。重均分子量从大到小排序为金露梅>藏沙棘>珠芽蓼>高山柳>高山绣线菊。高山绣线菊纯化缩合单宁的数均分子量(1390.9Da)和重均分子量(2284.3Da)均最低。3、从同一植物样品中分离出的不同组分CTs的分子量大小亦差异显著(P<0.05)。除金露梅样品V组分的CTs大于4000Da外,其余各组CTs分子量均介于500Da到4000Da之间。4、不同植物样品纯化CTs对总产气量和甲烷产量之影响差异显著(P<0.05)。金露梅、珠芽蓼和藏沙棘对总产气量和甲烷产量的抑制作用较明显,其中,金露梅产对甲烷产量抑制作用最大,珠芽蓼次之,高山绣线菊最小。不同分子量CTs对体外瘤胃发酵液pH值、干物质降解率影响作用不显著(P>0.05)但对瘤胃发酵液的总产气量、甲烷产量、氨态氮含量和残渣中性洗涤纤维降解率具有显著的抑制作用(P<0.05),即CTs分子量大小与上述参数之间呈显著负相关,相关系数r2分别为0.75,0.64,0.77,0.81。分子量最大的金露梅V组分CTs(4331.9Da)对总产气量和甲烷产量的抑制作用最大(P<0.05),其中,与对照燕麦相比抑制了79.8%的甲烷产生,反之最低分子量的CTs组分对总产气量和甲烷产量作用不明显。
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