论文部分内容阅读
柱型苹果作为苹果生产中的丰产树型之一，是苹果高度密植栽培的理想品种。决定柱型苹果遗传特性的柱型基因Co与调控树型发育的重要内源激素——赤霉素(GA)之间的关系是苹果柱型突变分子机制研究的热点问题。
本试验以柱型苹果“威赛克”及非柱型苹果“旭”为试材，利用苹果DELLA相关基因的序列信息设计了特异引物，通过PCR扩增克隆目的基因。将目的基因插入至pCAMBIA1305．1植物表达载体中，农杆菌EHA105介导的叶盘法转化本生烟，并通过PCR、RT-PCR以及GUS染色法检测转基因植株；将目的基因插入至GFP瞬时表达载体pEZ-NL，中，通过基因枪法，转入洋葱表皮细胞，在激光共聚焦显微镜下观察目的基因蛋白的亚细胞定位。试验结果如下：
1．从苹果“威赛克”和“旭”中克隆了2个与DELLA相关的基因——MdRGL1a、MdRGL2a，长度分别为1920bp、1743bp。经DNAMAN软件分析，威赛克、旭的MdRGL1a，威赛克、旭的MdRGL2a核苷酸序列同源性为100％;所推测的氨基酸序列均含有．DEllA蛋白家族所特有的结构区域。初步表明这两个基因在苹果不同品种间高度同源，与苹果威赛克的柱型突变无关。
2．构建了植物表达载体pRGL1a-GUS、pRGL2a-GUS，MdRGL1a、MdRGL2a转基因植株分别经潮霉素筛选，以及PCR、RT-PCR检测、GUS染色验证．MdRGL1a、MdRGL2a基因成功转入烟草植株中。
3．构建得到GFP瞬时表达载体pRGL1a-GFP、pRGL2a-GFP，荧光定位初步确定MdRGL1a和MdRGL2a蛋白主要定位在细胞核上。