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研究背景及目的:支气管哮喘(简称哮喘)是呼吸系统常见病、多发病。近年来发病率呈逐渐上升的趋势。它是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性变态反应性炎症,发病机制目前尚不完全清楚,但免疫-炎症机制被认为是其发病的重要机制,而嗜酸性粒细胞作为主要的免疫效应细胞参与整个炎症反应过程。微粒是细胞活化、损伤或凋亡后从细胞膜脱落的直径100nm至2μm的小囊泡颗粒,具有细胞间信号传导、促炎、免疫调节、组织修复等生物学活性[1],可通过与靶细胞的相互作用,启动靶细胞的生物学效应,与疾病的发生、发展息息相关。现已证实它与自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮)关系密切[2]。在子痫、糖尿病、脓毒血症、肿瘤、心血管疾病[3]中发现循环微粒水平明显升高,并与疾病的严重程度、分期及预后相关。因此,通过对微粒的检测、分析,可能优化疾病的诊断与治疗。我们课题组前期发现在COPD患者BALF中淋巴细胞微粒是增高的,并证实T淋巴细胞来源的微粒通过AKT/FOXO1通路阻滞气道上皮细胞于G1期,抑制气道上皮生长,活化p38-MAPK通路,介导上皮细胞凋亡。最新研究表明,呼吸道感染可以触发微粒的释放,通过ATP活化,微粒依赖P2X7/caspase-1通路释放IL-1β、IL-18,参与气道内中性粒细胞聚集、巨噬细胞活化和慢性炎症反应的维持[4-5],而感染常引起哮喘急性发作,使气道炎症、呼吸道症状加重,肺功能下降[6-7]。由此可见,微粒参与了气道慢性炎症过程,并起着促炎症反应作用。在哮喘的慢性气道炎症中,嗜酸性粒细胞作为主要的效应细胞在其活化或凋亡过程中必然会产生微粒,然而迄今为止有关嗜酸性粒细胞微粒的变化和作用国内外尚未见报道。因此,本研究拟检测哮喘患者循环血中嗜酸性粒细胞微粒数目的变化,并初步探讨该变化与疾病严重程度以及治疗疗效之间的可能关系,以期为哮喘诊治提供新的思路。方法:按照入组标准纳入研究对象共65例,其中哮喘组32例,健康对照组33例。采集外周静脉血,将所采集的样本进行离心处理后,用相应抗体标记,应用流式细胞仪检测每100μL外周血上清液中嗜酸性粒细胞微粒的水平。哮喘组还需完成ACT量表、肺功能(FEV1、FEV1%)、Fe NO测定、血常规(Eos count)、皮肤过敏原点刺试验等检查,在正规抗哮喘治疗(以吸入型糖皮质激素+长效β2受体激动剂为主)3个月后再次抽取相同体积的静脉血,检测循环血嗜酸性粒细胞微粒水平,复查上述指标,计算各指标前后变化率(Δ)=(治疗前值-治疗后值)/治疗前值×100%,并将微粒变化与各指标变化情况作相关性分析。分别按照过敏情况、哮喘控制水平将哮喘组分为过敏组、非过敏组和良好控制组、未控制组,并比较各组微粒水平。结果:1.哮喘组与对照组嗜酸性粒细胞微粒数目比较1.1检测发现嗜酸性粒细胞微粒在哮喘组治疗前、治疗后及对照组的数目分别为:(136.81±150.08)/100μl、(50.65±33.09)/100μl、(36.78±19.99)/100μl。1.2哮喘组治疗前循环血中嗜酸性粒细胞微粒数目高于对照组,差异有统计学意义(Z=-4.069,P<0.01)。1.3哮喘组治疗后循环血中嗜酸性粒细胞微粒数目高于对照组,差异有统计学意义(t=2.052,P=0.044)。1.4经治疗哮喘患者循环血中嗜酸性粒细胞微粒数目明显下降,即哮喘组治疗前高于治疗后,差异有统计学意义(Z=-4.526,P<0.01)。2.哮喘亚组嗜酸性粒细胞微粒数目比较2.1检测发现治疗前良好控制组、未控制组嗜酸性粒细胞微粒数目分别为:(119.05±112.41)/100μl、(156.93±186.06)/100μl,治疗后分别为:(39.76±20.83)/100μl、(63.00±40.29)/100μl,经比较治疗前两亚组嗜酸性粒细胞微粒数目无明显差异(Z=-0.227,P=0.821),治疗后哮喘良好控制组微粒数目低于未控制组(t=-2.086,P=0.046)。2.2检测发现治疗前过敏组、非过敏组嗜酸性粒细胞微粒数目分别为:(149.64±154.10)/100μl、(126.83±150.58)/100μl,治疗后分别为:(50.50±31.30)/100μl、(49.77±35.16)/100μl,经比较两亚组治疗前、后微粒数目均无明显差异(t=0.421,P=0.677;t=0.006,P=0.952)。2.3过敏组哮喘良好控制率[9(64.3%)]略高于非过敏组[8(44.4%)],但差异不具有统计学意义(χ2=1.245,P=0.265)。3.嗜酸性粒细胞微粒变化与其他临床指标变化的相关性3.1哮喘患者治疗后肺功能指标FEV1、FEV1%改善(P<0.01),Δ微粒与ΔFEV1、ΔFEV1%呈负相关(r=-0.558,P<0.01;r=-0.453,P=0.005)。3.2哮喘患者治疗后血嗜酸性粒细胞计数减少(P<0.01),Δ微粒与ΔEos count呈正相关(r=0.625,P<0.01)。3.3哮喘患者治疗后Fe NO水平减低(P<0.01),Δ微粒与ΔFe NO呈正相关(r=0.313,P=0.041)。3.4哮喘患者治疗后ACT评分增加(P<0.01),Δ微粒与ΔACT呈负相关(r=-0.399,P=0.012)。结论:1.哮喘患者循环血中嗜酸性粒细胞微粒数目明显高于健康对照组,并与外周血嗜酸性粒细胞、Fe NO等炎症指标变化一致,提示嗜酸性粒细胞微粒可能参与了哮喘慢性气道炎症反应的病理生理过程。2.哮喘患者循环血中嗜酸性粒细胞微粒与FEV1、FEV1%、ACT评分之间呈负相关,提示嗜酸性粒细胞微粒可能与哮喘严重程度有关。3.哮喘患者循环血中嗜酸性粒细胞微粒数目增多,经正规治疗微粒数目减少,其减少程度与哮喘控制水平有关,提示动态监测循环血中嗜酸性粒细胞微粒有助于哮喘控制评估。