【摘 要】
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目的：为揭示胚胎干细胞(ESCs)保持全能性和自我更新的机制，探讨胚胎干细胞的临床应用前景和潜力，本课题通过检测小干扰RNA(siRNA)干扰Oct4基因对胚胎癌细胞(ECCs)P19细胞中miR-3
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目的：为揭示胚胎干细胞(ESCs)保持全能性和自我更新的机制，探讨胚胎干细胞的临床应用前景和潜力，本课题通过检测小干扰RNA(siRNA)干扰Oct4基因对胚胎癌细胞(ECCs)P19细胞中miR-302表达的影响，为阐明关键性的转录因子维持胚胎干细胞全能性的机制积累实验数据。
方法：为了达到良好的干扰效果，我们向胚胎癌细胞P19中转录4个剂量的siRNAs(①0.5μg siRNA1和0.5μg siRNA2；②1.0μg siRNA1和1.0μg siRNA2；③1.5μg siRNA1和1.5μg siRNA2；④2.0μg siRNA1和2.0μg siRNA2)，controlsiRNAs(①1.0μg；②2.0μg；③3.0μg；④4.0μg)作为对照。采用Western blotting检测Oct4 siRNA对Oct4蛋白的干扰效果，并分析Oct4 siRNAs最适的干扰剂量；采用双荧光素酶报告基因分析系统检测siRNA干扰Oct4基因对P19细胞中miR-302基因启动子活性的影响。
结果：对于Oct4蛋白的最适干扰量为2.0μg siRNA1和2.0μg siRNA2，此剂量为后续研究siRNA干扰Oct4，影响miR-302的启动子活性提供了基础；向P19细胞中转染Oct4 siRNA可以降低miR-302启动子的荧光素酶活性。
结论：1.Oct4对miR-302的表达和转录激活具有调控作用。2.Oct4是miR-302的一个转录激活因子。
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