轻度认知功能障碍大鼠模型的快速构建及七氟烷对其认知功能的影响

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:liyqi
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第一部分:快速构建轻度认知功能障碍大鼠模型的方法目的:探讨应用D-半乳糖(D-gal)快速建立轻度认知功能障碍大鼠模型的方法和合适剂量。方法:大鼠随机分五组,每组20只,模型A、B、C、D组大鼠颈背部皮下分别注射D-gal 100、300、1000、2000 mg/(kg·d)1周,对照组皮下注射等容量生理盐水1周。注射结束后,次日开始Morris水迷宫实验,其中前五天进行定向航行实验,第六天进行60s的空间探索实验。水迷宫实验完成后,随机抽取各组一半的大鼠,麻醉后断头处死,取脑组织并制成匀浆,用ELISA法进行脑匀浆MDA含量、SOD活性及ACh E浓度的测定;各组另一半大鼠麻醉后进行灌注处理,取其脑组织做HE染色,观察海马组织的病理形态学变化。根据轻度认知功能障碍动物模型的特征确定用于建立该模型所需的D-半乳糖剂量。结果:1.各组大鼠存活率均为100%。与对照组比较,D组大鼠体重增加不显著,游泳速度减慢。2.在Morris水迷宫定向航行实验中,第2-5天,C组和D组大鼠平均逃避潜伏期均较对照组大鼠延长(p<0.05);空间探索实验中,C组和D组大鼠60s平均穿越原平台次数分别为3.05±0.76次和2.05±0.69次均较对照组4.40±1.05次显著减少(p<0.05)。3.C组和D组大鼠脑匀浆MDA含量分别为29.19±2.35 ng/ml和32.57±2.05 ng/ml,比对照组20.52±2.08 ng/ml显著增高(p<0.05);C组和D组大鼠脑匀浆SOD活性分别为1.46±0.12 IU/ml和1.34±0.13IU/ml,比对照组1.74±0.12 IU/ml显著降低(p<0.05);C组和D组大鼠脑匀浆ACh E浓度分别为3.52±0.70 ng/ml和4.02±0.39 ng/ml,比对照组1.72±0.33 ng/ml显著增高(p<0.05)。4.病理形态学结果显示,C组大鼠海马CA1区部分椎体细胞缺失,细胞密度稍下降,较多量椎体细胞显示胞核固缩、深染,出现少量细胞凋亡,脑白质正常;D组大鼠CA1区椎体细胞密度明显下降,排列明显疏松、紊乱,多量细胞出现胞核固缩、深染,细胞凋亡。结论:大鼠皮下注射D-gal 1000 mg/(kg·d)1周,出现符合轻度认知功能障碍动物模型的病理变化及其特征改变。第二部分:不同吸入浓度七氟烷对D-半乳糖致轻度认知功能障碍大鼠认知功能的影响目的:研究不同浓度七氟烷对轻度认知功能障碍大鼠的影响,初步探讨七氟烷影响该类大鼠的术后认知功能的可能机制。方法:大鼠皮下注射D-gal 1000 mg/(kg·d)1周以建立轻度认知功能障碍大鼠模型。建模后的大鼠按照随机数字表法分组,M0组吸入100%O2(2L/min)3h;M1组吸入2%七氟烷与100%O2(2 L/min)3h;M2组吸入4%七氟烷与100%O2(2 L/min)3h。停止吸入后,采取各大鼠尾静脉血进行血气分析;24小时后所有大鼠进行水迷宫实验,完成后,随机抽取各组一半的大鼠,麻醉后断头处死,取脑组织并制成匀浆,用ELISA法测定Aβ1-42蛋白和Tau蛋白含量;各组另一半大鼠麻醉后进行灌注处理,取脑组织做HE染色,观察海马组织的病理形态学改变。结果:1.各组大鼠均苏醒良好,无死亡。血气分析显示各组间PH、Pa O2、Pa CO2、HCO3-值无明显差异(p>0.05)。2.在Morris水迷宫定位航行实验中,与M0组相比,M1组大鼠每天的逃避潜伏期延长无统计学意义(p>0.05),而M2组大鼠每天的逃避潜伏期延长有统计学意义(p<0.05)。在水迷宫空间探索实验中,与M0组为3±0.73次相比,M1组大鼠的穿台次数为2.88±0.72次,差异无统计学意义(p>0.05),而M2组大鼠的穿台次数为2±0.63次,差异有统计学意义(p<0.05)。3.与M0组26.53±3.38 ng/ml相比,M1组大鼠脑匀浆中Aβ1-42蛋白含量为28.77±3.06 ng/ml,差异无统计学意义(p>0.05),而M2组大鼠脑匀浆中Aβ1-42蛋白含量35.05±2.68 ng/ml,差异有统计学意义(p<0.05)。与M0组265.06±26.03 ng/ml相比,M1组大鼠脑匀浆中Tau蛋白含量为278.29±25.13 ng/ml,无统计学意义(p>0.05),而M2组大鼠脑匀浆中Tau蛋白含量317.79±23.45 ng/ml,差异有统计学意义(p<0.05)。4.病理形态学结果显示,M0组大鼠海马CA1区部分椎体细胞缺失,细胞密度稍下降,较多量椎体细胞显示胞核固缩、深染,出现少量细胞凋亡,脑白质正常;M1组大鼠海马CA1区椎体细胞排列疏松,细胞出现核固缩、深染,少量细胞凋亡;M2组大鼠海马CA1区椎体细胞密度明显下降,排列明显疏松、紊乱,多量细胞出现胞核固缩、深染,细胞凋亡。结论:1.吸入4%七氟烷可导致轻度认知功能障碍模型大鼠的认知功能继续恶化。2.七氟烷可能是由于诱导大鼠大脑中Aβ1-42蛋白沉积和/或Tau蛋白增多而影响大鼠的学习记忆能力,损害其认知功能。
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