栀子离体培养及愈伤组织成分提取

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栀子(Gardenia jasminoides Ellis.)为茜草科栀子属植物,是一种使用较广泛的园林观赏树种和药用树种。本文研究了栀子的腋芽丛生离体繁殖和开花诱导,以及栀子果皮,叶片,种子愈伤组织的诱导,并对果皮等愈伤组织所产生的次生代谢物进行了初步提取和分离分析。以栀子的茎尖和腋芽为材料进行丛生芽的诱导,培养基MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L的诱导效果明显,能在较短时间内获得大量的丛生芽,单个外植体腋芽诱导数量最高可达50个。对丛生之后的腋芽进行开花诱导,在培养基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+GA3 1.0mg/L中,有花蕾的形成,用该培养基继代1-2次后,移栽到1/2MS+NAA 0.5mg/L培养基中,植株生根,花蕾继续生长,最终开花,且有一朵花形成果实并能成熟。再生芽在1/2 MS+IBA 0.5mg/L+GA3 0.1mg/L培养基中进行生根培养,生根率可达98%,生根培养4周后移栽到营养土中,移栽成活率达95%。以栀子果皮、叶片、种子为材料进行愈伤组织诱导的研究。结果表明:B5培养基所得到的愈伤组织颜色为绿色质地致密,MS培养基中愈伤组织浅黄疏松。NAA和KT的激素组合对愈伤组织的诱导效果较好。MS+NAA 1.0mg/L+KT0.25mg/L培养基诱导出的愈伤组织颜色浅黄,质地疏松,增殖快速。用同样激素组合的液体培养基对愈伤组织进行液体培养,可获得大量黄色的悬浮细胞。对固体培养的愈伤组织以及液体培养获得的细胞进行提取、分离、纯化,以分析其次生代谢物。较佳提取条件是:用4倍于材料量的50%丙酮或者70%乙醇作为提取剂,超声波辅助提取1h,提取液蒸馏浓缩成粉末,溶解后过大孔树脂,分离得到部分物质,通过薄层层析、紫外-可见光谱扫描以及HPLC对粗体物和分离得到的物质进行了检测,结合相关文献初步推测愈伤组织以此条件得到的提取物主要为栀子苷和绿原酸等。
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