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利用RT-PC扩增了PRRSV吉林分离株(JL)M蛋白基因,并对扩增序列进行了分析。结果显示JL株M蛋白基因全长525bp、编码175个氨基酸;与GenBank中己报道的PRRSV美洲型部分毒株相比,M蛋白基因核苷酸的同源性为91.4%-99.8%,推导的氨基酸序列同源性为92.1%-99.7%:遗传进化分析表明,JL株M蛋白基因与BJ-4毒珠、VR-2332等毒株聚为一枝,属于PRRSV美洲基因型;用DNAstar软件对儿株M蛋白抗原表位进行分析,发现其与BJ-4珠和VR-2332株差异不明显,说明儿株与部分强毒株M蛋白有相似的抗原特性。
以感染性犬2型腺病毒全基因组为载体,构建了含有M蛋白基因的重组质粒pPoly-II-CAV-2.M。脂质体介导将重组基因组转染MDCK细胞,获得重组病毒,经多酶切和PCR鉴定,表明获得了含M蛋白基因的重组病毒CAV-2-M;对重组病毒CAV-2-M的遗传稳定性和M蛋白基因的转录和表达进行了检测。结果表明,重组病毒在体外连续传代,性质稳定,没有出现外源基因的缺失和重排;重组病毒感染细胞后能够稳定转录和表达PRRSV M蛋白基因,具有良好的反应原性。
将重组病毒CAV-2-M采用肌肉注射接种20日龄仔猪,定期对受试动物血清进行检测。结果显示,重组病毒CAV-2-M能够刺激机体产生针对M蛋白的特异性抗体,并可检测到较微弱的中和PRRSV活性:同时对受试动物外周血进行了淋巴细胞增殖反应检测,结果表明M蛋白可以特异地刺激受试动物淋巴细胞增殖。
本研究扩增了PRRSV-JL株M蛋白基因,并获得了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白的重组犬2型腺病毒,该重组病毒可以诱导猪体内产生针对PRRSV M蛋白的体液和细胞免疫应答,为PRRS重组疫苗的研究提供了一条新的途径。