论文部分内容阅读
目的:探讨胍丁胺(AGM)对创伤脓毒症小鼠的生存保护作用及其作用机制。方法:①构建创伤出血(双后肢骨折+放血35%,TH)、脓毒症(脂多糖,LPS 25mg/kg)、创伤脓毒症(TH+LPS)小鼠模型,观察各种模型下小鼠的死亡率。分别在创伤和/或脓毒症后给予胍丁胺治疗,观察不同时间与不同剂量胍丁胺干预对创伤脓毒症小鼠死亡率的影响。②将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、创伤出血组(TH)和胍丁胺治疗组(TH+AGM),分别于创伤后3h、24h处死小鼠,收集血、肝、脾组织。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和肝组织匀浆白细胞介素(IL-6、IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;全自动生化分析仪检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)及丙氨酸转氨酶(ALT)的含量;全自动血液分析仪检测血红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、白细胞计数(WBC)及血小板(PLT)的水平。MTT检测刀豆蛋白A(ConA)刺激脾细胞增殖反应,ELISA法检测Con A刺激脾细胞分泌IL-2和γ-干扰素(IFN-γ)的水平。③采用不同剂量LPS(10mg/kg、40mg/kg)构建小鼠脓毒症模型,在有或无AGM干预条件下,分别使用α2受体拮抗剂育亨宾(YHB)、NMDA受体拮抗剂MK-801、I1受体高亲和力配基依法克生(EFA)及I2受体高亲和力配基咪唑克生(IDA)预处理,检测LPS后6h血清IL-6的水平,观察各组小鼠的死亡率。通过构建盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症小鼠模型,观察AGM对多微生物脓毒症小鼠生存的影响。结果:①TH小鼠的死亡率为6.67%;与LPS组相比,TH显著增加LPS小鼠的死亡风险(83.33%比13.33%,P<0.05)。与TH+LPS组比较,LPS后AGM(400mg/kg)治疗能明显降低小鼠死亡率(31.25%比87.50%,P<0.05)。与TH+LPS组相比,联合创伤后AGM(100、200、400mg/kg)及脓毒症后AGM(400mg/kg)治疗剂量依赖性地降低创伤脓毒症小鼠的死亡率(40%、33.33%、25%比80%,均P<0.05)。②与对照组相比,TH组与AGM组在创伤24h后RBC、HGB及PLT均明显降低[RBC(×1012/L):6.16±1.13、6.56±1.44比9.60±0.42;HGB(g/L):88.75±24.68、96.75±20.50比144.50±8.54;HCT(%):29.80±7.74、32.31±7.11比45.60±2.34;均P<0.05]。与TH组比较,AGM治疗能降低创伤后3h血清炎症介质[ng/L:TNF-α(111.56±25.47比145.38±31.50)、IL-6(412.56±44.33比496.94±50.76)、IL-1β(273.38±45.25比321.31±43.02),均P<0.05]的水平;抑制创伤后24h肝组织匀浆细胞因子TNF-α(ng/mg:28.92±3.16比32.93±4.90)与IL-6(ng/mg:9.03±1.28比11.20±1.66)的升高(均P<0.05);降低创伤24h后血清肝酶[U/L:AST(245.7±22.1比405.9±31.2)、ALT(51.6±5.0比92.1±6.3)和LDH(478.7±25.3比606.7±36.3),均P<0.05]的水平。AGM治疗亦能显著增强创伤后脾细胞增殖能力[增值率(%):74.86±5.75比40.97±4.13,P<0.05],提高Con A刺激脾细胞分泌IFN-γ与IL-2[ng/L:IFN-γ(327.8±23.6比91.6±12.3)与IL-2(74.8±10.4比53.4±6.4),均P<0.05]的能力。③AGM能降低LPS诱导的小鼠死亡率(35%比85%,P<0.05),并降低CLP诱导的小鼠脓毒症死亡率(40%比80%,P<0.05)。MK-801、AGM及IDA均能抑制LPS诱导的血清IL-6(μg/L:51.03±5.92、39.5±9.24、36.63±4.19比67.95±5.95,均P<0.05)升高,但IDA与AGM无协同抗炎作用。YHB、MK-801及EFA均无生存保护作用,并且不影响AGM对脓毒症小鼠的生存保护作用。AGM、IDA均能明显降低脓毒症小鼠的死亡率(43.75%、43.75%比81.25%,均P<0.05),且IDA与AGM无协同生存保护作用。结论:创伤失血能显著增加脓毒症小鼠死亡风险,在脓毒症发生前后胍丁胺治疗能剂量依赖性地降低创伤脓毒症小鼠死亡率。其机制包括:①胍丁胺能抑制创伤诱导的过度炎症反应,减轻创伤后肝功能损害,提高创伤后脾细胞免疫功能;②胍丁胺能降低LPS、CLP诱导的小鼠死亡率;同时可能通过I2受体介导生存保护作用,而不依赖于α2肾上腺素受体、NMDA受体及I1受体。