siRNA靶向沉默ZFX基因对肝内胆管癌细胞的生物学功能的影响

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目的构建ZFX基因的siRNA片段,并转染肝内胆管细胞癌细胞系HCCC-9810,观察转染后肝内胆管细胞癌细胞的ZFX的表达水平的变化。通过下调HCCC-9810细胞的ZFX的表达水平,观察对肝内胆管细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆等相关能力的影响,初步阐明ZFX基因在肝内胆管细胞癌的发生、发展中的作用。方法根据文献报道的ZFX基因siRNA序列进行合成,通过脂质体lipofectamine2000介导转染肝内胆管癌细胞株HCCC-9810,根据转染siRNA的片段不同将实验分为空白对照(Cell)、转染含无义序列的siRNA片段(NC-siRNA)、转染含ZFX目的基因的siRNA片段(ZFX-siRNA)三组,RT-PCR检测ZFX基因的m RNA表达水平的变化,Western blot检测ZFX基因蛋白水平的变化。最后分别用软脂琼克隆形成实验、CCK-8增殖实验、Transwell实验检测转染后HCCC-9810各组细胞的克隆形成能力、细胞增殖能力,细胞的迁移、转移能力的变化。结果将siRNA转染HCCC-98110细胞株72h后,RT-PCR、Western blot检测结果表明与Cell、NC-siRNA组相比,ZFX-siRNA有效降低了HCCC-9810细胞系的ZFX的m RNA水平及蛋白水平的表达(P<0.05),而Cell、siRNA-NC两组间差异无明显统计学意义(P>0.05),证明了ZFX-siRNA对HCCC-9810细胞的ZFX基因有明显沉默效率(65.9%)。克隆形成实验显示:ZFX沉默后,该细胞系克隆形成能力明显减弱(P=0.019)。CCK-8增殖实验证明第二天开始实验组细胞增殖能力明显降低(t=5.366 P=0.0058)。Transwell实验显示,Cell、siRNA-NC组细胞迁移、转移能力均明显高于siRNA-ZFX组细胞(P=0.001,P=0.002)。各组实验中Cell、siRNA-NC组之间均未见明显差异(P=0.1569,P=0.0649)。结论本实验ZFX-siRNA成功降低肝内胆管癌细胞系HCCC-9810中ZFX基因的表达,证明ZFX基因的表达降低后可抑制肝内胆管细胞癌细胞的增殖、克隆、迁移及转移能力,初步阐明ZFX在肝内胆管细胞癌HCCC-9810的发生发展中起到重要的作用。
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