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目的:阐明Diekkopf-1(Dkk-1)是否在激素诱导下人骨髓间充质干细胞(Humanbone marrow mesenchymal stem cells hMSC)成脂、成骨反向分化中具有调节作用,为进一步研究其在糖皮质激素性骨质疏松症中的作用奠定理论基础。
方法:1.体外培养hM-SC,并激素诱导其向脂肪细胞和成骨细胞分化。2.运用流式细胞术鉴定hMSC,油红O染色鉴定脂肪细胞,Von Kossa染色和碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞。3.运用Real time-PCR检测Dkk-1在hMSC、hMSC体外诱导成脂和成骨分化过程中不同时间点(24时、5天、9天、13天、17天、21天、25天)的相对表达量。
结果:1.体外成功培养hMSC,经流式细胞学鉴定,hMSC为纯化的细胞群体。2.激素诱导hMSC向脂肪细胞及成骨细胞分化,成脂诱导组油红O染色阳性,成骨诱导组Von Kossa染色及碱性磷酸酶染色阳性。3.Dkk-1在hMSC、hMSC体外诱导成脂和成骨分化过程中不同时间点的表达量,在不同组间同时间点进行横向比较和同组间不同时点进行纵向比较,差异均无显著性(P>0.05)。
结论:Dkk-1可能只在hMSC向骨祖细胞谱系转化之后的早期对成骨细胞起抑制作用,而在激素诱导下hMSC向成脂、成骨反向分化中无明显调节作用。