酒精诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡过程中自噬的研究

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目的:使用不同浓度的酒精作用于人肝癌细胞SMMC-7721,观察细胞凋亡过程中自噬的发生。方法:四甲偶氮唑盐比色法(MTT)检测酒精对SMMC-7721细胞生存率的影响;DAPI染色观察细胞凋亡;间接免疫荧光法观察细胞自噬标志物LC3与p62表达变化;透射电镜观察细胞中自噬体的超微结构;蛋白免疫印迹法(Western-Blot)定量检测LC3与p62蛋白量表达。结果:酒精浓度分别为100 mmol/L、200 mmol/L、400 mmol/L和800 mmol/L,处理SMMC-7721细胞24h,与0 mmol/L酒精浓度组比较,细胞生存率分别为76.35%(P<0.05)、56.25%(P<0.01)、45.22%(P<0.01)和38.42%(P<0.01),酒精可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,生存率呈浓度依赖性。DAPI染细胞核,随酒精浓度增加可见典型细胞凋亡特征性变化,凋亡率较对照组有显著差异(P<0.05),酒精可显著诱导SMMC-7721细胞凋亡;间接免疫荧光观察酒精致SMMC-7721细胞自噬,自噬标志物LC3在细胞核附近密度增高,p62在细胞质中也有增加,并且可见LC3与p62点状共定位;Western-Blot结果显示,不同酒精浓度处理SMMC-7721细胞2h时,LC3-II和p62的表达量在200 mmol/L时都达到最高,较去血清对照组有统计学意义(P<0.05),LC3-I表达量降低但无统计学意义(P>0.05);酒精浓度200 mmol/L处理SMMC-7721细胞不同时间,LC3表达量较去血清对照组有显著增加,p62表达量在2h和6h明显增加,之后逐渐降低;使用单纯去血清培养基对照处理相同时间,LC3表达量较去血清对照组有显著增加,但趋势与含酒精组不同,p62表达量在2h和6h明显增加,但增加程度有所降低;透射电镜也观察到SMMC-7721细胞中有自噬体存在。结论:酒精显著诱导SMMC-7721细胞凋亡;酒精诱导SMMC-7721细胞凋亡过程中有自噬发生。
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