论文部分内容阅读
目的：研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)对A498肾癌裸鼠移植瘤的影响。方法：培养肾癌A498细胞和人MSC,用CM-Dil标记MSC并对标记后MSC细胞的活性和增殖能力进行比较,构建A498肾癌裸鼠皮下移植瘤模型,实验裸鼠共36只,当裸鼠移植瘤长径达0.5-0.8cm,将其随机分为2组：一组注射CM-Dil标记的MSC (MSC组),另一组注射生理盐水(NS对照组),其中,每组各有6只用于观察生存期。从接种肿瘤的第1天起,隔天观察裸鼠饮食、排便、活动状况以及肿瘤的生长情况：在注射MSC之后的不同时间段(3天,6天,15天,30天)用游标卡尺测量裸鼠皮下移植瘤的长径、短径,并计算皮下移植瘤体积,记录注射当天开始至裸鼠死亡的时间,计算各组裸鼠平均生存时间,比较两组裸鼠生存时间差异。分别在MSC注射接种后的3天,6天,15天,30天,将MSC组和NS对照组裸鼠各处死3只,留取MSC组皮下移植瘤组织冰冻切片,在荧光显微镜下,观察CM-Dil标记的MSC在不同的时间点裸鼠肿瘤组织中的分布情况；苏木素-伊红(hematoxylin-esosin,HE)染色后行HE染色病理学观察。取各组小鼠上述时间点的肿瘤组织切片,用RT-PCR和Western Blot分别检测Twist基因和蛋白的表达情况。结果：CM-Dil标记的MSC活性和增殖与未标记的MSC无明显改变；MSC组裸鼠皮下移植瘤在注射后15天内增长缓慢,与NS对照组比较有显著差异(P<0.05)。在注射MSC的15天后,MSC组皮下移植瘤增长速度减慢,15天与30天时,两组裸鼠肿瘤体积均较前增大,但差异无统计学意义(P>0.05)；MSC组裸鼠的生存期延长；荧光冰冻切片追踪裸鼠肿瘤组织中CM-Dil标记的MSC,荧光显微镜下观测到CM-Dil标记的MSC在绿色荧光激发下,细胞膜呈明亮的橙红色,细胞质与细胞核呈类圆形暗区,随着时间的推移,荧光亮度逐渐变弱,荧光范围也逐渐缩小;HE染色结果显示MSC组炎症反应较NS对照轻；Twist基因以及Twist蛋白在MSC组的表达明显比NS组少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：骨髓间充质十二细胞移植显著抑制A498肾癌裸鼠移植瘤的生长,并延迟受体裸鼠的生存时间,预示着骨髓间充质干细胞在肾癌的治疗中巨大的潜力和前景；同时,Twist的表达在这一过程中农现出显著的相关性,有望成为肿瘤发生和发展等生物学行为的重要指标,将有可能成为骨髓间充质干细胞治疗肿瘤的新靶点。