光皮桦成花相关SPL基因的克隆、表达及功能分析

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SBP-box基因家族是植物特有的一个转录因子基因家族,广泛存在于绿色植物中,在成花过程中起关键的调控作用。本研究以珍贵用材树种光皮桦为材料,采用RACE的方法,克隆获得光皮桦的13个SPL基因,通过生物信息学、亚细胞定位、荧光定量PCR分析和酵母双杂交等手段,对其进行了功能分析,获得以下主要结果。1.序列分析结果显示,BlSPL5的ORF最长,达到3249bp,编码1082个氨基酸;Bl SPL3的ORF最短,仅为450bp,编码149个氨基酸;在这些光皮桦SPL转录因子的N端均具有一个保守的SBP结构域,仅在BlSPL4、BlSPL5和BlSPL12的C端含有一个较保守的ANK结构域。系统进化分析结果显示,这13个BlSPLs分别属于陆地植物SPL基因的8个不同分支。2.采用RLM-RACE的方法,对Bl SPL1、3、6、7、8、9和11的mi R156/157剪切位点进行了验证。结果显示,除Bl SPL8的剪切位点在mi R156/157的11/12位外,其余Bl SPLs的剪切位点均在10/11位,说明它们的剪切模式有比较强的一致性;而在剪切发生的位点,除Bl SPL9外其余SPL基因均有1个碱基mi R156/157错配。3.利用洋葱表皮细胞对部分Bl SPL基因进行了亚细胞定位分析,结果显示,mi R156靶标的Bl SPL1和3均定位于细胞核,符合转录因子的定位特征。4.荧光定量PCR分析结果表明,Bl SPL1、2、5、11、13在雄花序中高表达,推测它们与成花相关;mi R156及其靶标的Bl SPLs基因在不同年龄植株中的表达呈明显负相关,表明该途径可能是光皮桦童期转换的重要途径。5.酵母双杂交结果显示,Bl SPL1、5、13与Bl DELL蛋白有互作,结合表达相关性分析,说明这些功能复合体可能共同参与GA介导的成花途径。
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