第一部分，H-FABP检测试剂盒的临床验证　　 研究背景：　　 脂肪酸结合蛋白(fattyacidbindingproteins，FABPs)是一组低分子量(14KD～15KD左右)结合长链脂肪酸的胞质蛋白，分布于哺乳动物的心肌、小肠、肝脏、脂肪组织、脑、表皮等组织细胞中，目前已发现九种类型，以其在组织中的分布而命名，它们在蛋白质序列上显示有很大的同源性。各型FABP能够结合各种类型脂肪酸，在脂肪酸的摄取、转运及代谢调节中具有重要作用。调节脂肪酸代谢是各型FABP的共同作用，但在不同组织、不同条件下各型FABP的存在状况及活性均有所不同。　　 由于各型FABP在分布上具有组织特异性，在结构和功能上各有异同，这保证了在不同组织、不同条件下脂肪酸代谢可以有条不紊地进行，同时也为一些疾病的诊断提供了便利。FABP是低分子量可溶性蛋白，在组织细胞受损时可快速释放入血和尿中。心型脂肪酸结的蛋白(hearttypefattyacid-bindingprotein，H-FABP)特异地存在于心肌组织中，约占心脏全部可溶性蛋白质的4％～8％，H-FABP与心肌细胞内的长链脂肪酸相结合，将其从细胞质膜向脂化和氢化部位运输，从而进入能量代谢体系氧化分解最终生成三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate，ATP)，为心肌收缩提供能量。　　 心肌缺血导致心肌细胞坏死，H-FABP从心肌细胞渗漏到血液中，从而使外周血中的H-FABP上升。我们通过观察，其在急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction，AMI）发生后1～2h立即升高，并持续至12h，保持较高水平和较高的敏感性，在24h左右恢复并接近正常水平，与肌红蛋白(myoglobin，Mb)相似，但由于其在AMI发生早期即出现异常升高，而较Mb、C-反应蛋白(C-reactionprotein，CRP)更具心肌特异性，受其他组织影响甚小，国内外很多学者研究也证实了H-FABP与肌红蛋白在AMI诊断上具有基本相同的时效性，但在诊断的敏感性和特异性上优于Mb，因此H-FABP可望成为更理想的诊断AMI的早期生化标志物。　　 为了加快H-FABP在我国的应用和推广，我们研究小组在中央保健专项课题的资助下，联合北京大学生命科学院和香港科技大学完成了抗原H-FABP的克隆、表达和纯化，抗H-FABP单克隆抗体和多抗的制备，H-FABP酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）的建立，以及H-FABP在AMI早期诊断价值评价等研究。AMI是严重危害患者生命的临床急症，快速诊断、及时决策是挽救患者生命的重要保，救护地点检测或床旁检测(pointofcaretesting，POCT)在此类疾病的诊断中有重要价值，因此，近期我们与兰州生物制品研究所联合研发了H-FABP定性床旁快速检测的试剂盒（胶体金法），按照国家食品药品监督局《体外诊断试剂的临床研究技术指导原则》，需对本试剂盒进行临床试验验证。　　 研究目的：　　 评价开发的H-FABP定性床旁检测试剂盒与国家食品药品监督局批准上市的同类试剂的临床诊断的等效性及临床符合性。　　 研究方法：　　 样本为中国人民解放军第305医院（A机构）和中国人民解放军总医院(B机构)住院、门诊及体检中心就诊人员的血浆或血清，根据入选标准和排除标准共入选240例样本，采用平行、双盲、对照试验标准对试验产品和对照产品进行检测，所得数据应用SPSS13.0软件包进行统计学描述与分析，配对资料采用McNamarasTest卡方检验，两种试验产品结果的一致性采用Kappa检验，采用双侧检验，认为P＜0.05为差异有统计学意义。　　 研究结果：　　 1.1、以对比产品为标准，试验产品与对比产品在A、B两家临床试验机构的测定一致率和不一致率的结果显示:两家临床试验机构的测定结果一致性无差异(x2=0.817，v=1，P=0.366，＞0.05)，测定数据可以进行合并分析。　　 1.2、以对比产品诊断结果为标准，A机构试验产品与对比产品的结果进行配对分析，阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为100％、95.31％、97.5％;B机构试验产品与对比产品的结果进行配对分析，阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为100％、96.97％、98.33％;两家试验单位数据合并后，试验产品与对比产品的结果进行配对分析，阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为100％、96.16％和97.92％，并对试验产品与对比产品测定结果进行Kappa检验，结果显示两种产品的测定结果的一致性很好(Kappa指数=0.958，检验U=14.857，P=0.000)，证明试验产品的质量与对比产品等效。　　 1.3、以临床诊断为标准，A机构试验产品与临床诊断结果进行配对分析，阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为98.33％、100％和99.17％;对比产品与临床诊断结果进行配对分析，阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为93.33％、100％和96.67％。B机构试验产品与临床诊断结果进行配对分析，阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为93.33％、100％和96.67％;对比产品与临床诊断结果进行配对分析，阳性符合率、阴性符合率和总符合率为90.00％、100％和95.00％;数据合并后，试验产品与临床诊断结果进行配对分析，阳性符合率为95.84％，阴性符合率为100％，总符合率为97.92％;对比产品与临床诊断结果进行配对分析，阳性符合率91.67％，阴性符合率为100％，总符合率为95.83％。说明试验产品的特异性好、准确性高，临床符合性好。　　 研究结论：　　 1、兰州生物研究所生产的H-FABP检测试剂盒（胶体金法）与同类上市产品深圳康保公司生产的H-FABP检测试剂盒（胶体金法）具有等效性。　　 2、兰州生物研究所生产的H-FABP检测试剂盒（胶体金法）的临床符合性良好。　　 第二部分，Rochecobash232快速检测NT-proBNP和cTnT的性能指标测定及探讨　　 研究背景：　　 急性冠状动脉综合征(acutecoronarysyndrome，ACS)（特别是AMI）和心力衰竭(heartfailure，HF)是威胁保健对象健康和生命安全的常见心血管急症、重症，现场及时发现和明确诊断对改善预后、保证生活质量具有重要意义。　　 作为心肌坏死标志物的肌钙蛋白，是心肌梗死诊断的重要客观标准之一。2007年10月欧洲心脏病学会、美国心脏病学会、美国心脏协会和世界心脏联盟专家组共同制定并发表了关于“心肌梗死全球统一定义”的专家联合共识。新定义强调，心脏标志物（最好是肌钙蛋白）至少有一次超过正常值上限的99百分位，再加上至少一项心肌缺血证据（包括症状、心电图缺血改变、病理性Q波或影像学证据）即诊断心肌梗死（myocardialinfarction，MI）。同时，肌钙蛋白水平对ACS治疗策略的制定（如急诊溶栓和介入治疗）亦具有重要指导价值。　　 肌钙蛋白(cardiactroponin，cTn)，包括肌钙蛋白I(cardiactroponinI，cTnI)和肌钙蛋白T(cardiactroponinT，cTnT)，是肌钙蛋白调节复合体的亚单位。目前认为，在MI发生时，早期释放的肌钙蛋白来自于游离的细胞质池，而随后不断释放的肌钙蛋白来自于受损区内降解的肌动蛋白和肌球蛋白纤维。在胸痛发作后3-6小时后，血清中即可检测到cTnI和cTnT，并且可在发病开始后10-14天仍然增高。早在数年前，cTn在心肌损伤诊断中的重要作用就已经得到了普遍认同。最近发表的关于MI全球统一定义则进一步肯定了cTn在MI诊断中显示出来的重要价值。　　 一般来说，cTn水平升高不仅反映是心肌不可逆损伤的反映，其水平与心肌梗死面积的大小相关;并可对并发症的出现和治疗效果进行预测，对ACS的危险分层具有重要应用价值，在临床干预治疗中有指导价值，因此，cTn在许多相关临床实践指南中已显示出重要意义。　　 脑钠肽(brainnatriureticpeptide，BNP)属于肽类神经激素类，主要由心室分泌，其功能是调节血压、电解质平衡及体液平衡。左心室功能不全时，脑钠肽前体(pro-brainnatriureticpeptide，proBNP)裂解为有生物性活性的BNP和没有生物学活性的N-末端脑钠肽前体(N-Terminalpro-brainnatriureticpeptideprecurso，NT-proBNP)。近年来，大量研究表明，BNP或其类似物检测是在心血管医学中十分有价值的诊断和预后判断工具。并且，有关他们的临床和化验指南均已发表，而且越来越多的实验室被要求进行BNP和NT-proBNP的检测。目前研究发现，BNP在普通人群心脏疾病的检测和预后评估方面具有重要价值，特别是与心脏超声结合在一起，对于急性、慢性心力衰竭的诊断具有重要价值;是对急诊呼吸困难患者进行鉴别诊断的重要客观指标。并且，根据BNP水平变化，还可以发现无症状的心衰、舒张功能异常的患者，以及对心衰病情进行动态监测。NT-proBNP改善了急性心衰（acuteheartfailure，AHF）的诊断，NT-proBNP在心室扩张时，由心肌细胞释放，因此，与仅依靠临床症状判断相比，NT-proBNP的检测可提高急性心衰诊断的准确性。NT-proBNP阴性预测值为98％，阴性的NT-proBNP检测结果可协助排除心衰。并且国内外一系列研究表明，NT-proBNP检测对急性冠脉综合症特别是急性心肌梗死患者的预后评估作用很强，在高危患者中发现N-proBNP水平升高，本身就是独立高危因素，在这种情况下，应当考虑更深入的心血管治疗。　　 对于高龄保健对象，不论是发生ACS或是HF，由于本身存在多系统慢性疾病，在发病上症状更趋于不典型，如何早期识别心血管急症、重症，则更多依靠客观检查。所以，上述两种心脏标志物检测价值则更加突出。并且，由于保健对象的高龄、多慢性疾病特点，若不及时明确病情并采取合理治疗，很可能延误时间，而使病情迅速转化为多系统功能衰竭，甚至死亡。因此，从进一步提高保健对象的救治工作质量角度出发，迅速得到上述心脏标志物的检测结果无疑至关重要。　　 但是，目前临床上cTnT和NT-proBNP两种标志物的检测几乎都在医院中心实验室完成，所需时间一般在数小时，甚至超过一天，对于诊断和治疗策略选择的指导价值均被严重削减。两种标志物的床旁检测在国外已经开展了初步临床应用，实践证明，结果迅速，有较好的稳定性。目前，国外已有医疗机构对急诊、ICU护士进行培训，对可疑心脏病人进行上述两种标志物的床旁快速检测。根据报道，与传统中心实验室检测方法相比较，该快速检测方法可以显著缩短从抽血到结果发布时间。美国Roche公司生产的罗氏Elecsys2010全自动免疫分析仪在cTnT和NT-proBNP的检测上处于世界领先地位，现该公司推出了Rochecobash232便携式检测仪，可快速检测cTnT和NT-proBNP以进行现场诊断。　　 本研究从保健工作实际需求出发，拟对Rochecobash232便携式手持血液分析仪快速检测cTnT和NT-proBNP的可靠性等进行系统评价分析。　　 研究目的：　　 通过系统评价Rochecobash232便携式检测仪快速检测cTnT和NT-proBNP两种心脏标志物的检测指标，确定其性能的可接受性。使其应用于保健工作中遇到的心血管急症、重症的现场救治，进一步提高保健工作现场救治水平。　　 研究方法：　　 本实验研究对象为2011年解放军总医院和解放军305医院急诊就诊并怀疑急性冠脉综合症和急性心衰病人，76份临床全血标本用Rochecobash232检测NT-proBNP和cTnT并同时留取血浆用RocheElecsys2010全自动免疫分析仪检测NT-proBNP和cTnT，评价两者相关性。通过对Rochecobash232检测NT-proBNP和cTnT的精密度试验、回收试验、抗干扰试验和稳定性试验来评价其临床性能。所得数据应用SPSS13.0软件包和Excell表进行统计学描述与分析，认为P＜0.05为差异有统计学意义。　　 研究结果：　　 2.1、方法学比较实验:在60～9000pg/ml范围内，Rochecobash232和Elecsys2010全自动免疫分析仪测定NT-proBNP的相关系数R=0.961，P＜0.001;在60～3000pg/ml范围内，Rochecobash232和Elecsys2010全自动免疫分析仪测定NT-proBNP的相关系数R=0.948，P＜0.001，两者具有良好的相关性。　　 2.2、精密度试验:Rochecobash232检测NT-proBNP的批内变异系数为2.2％～6.6％，批间变异系数为4.6％～5.9％;Rochecobash232检测cTnT的批内变异系数为4.8％～7.4％，批间变异系数为5.2％～7.6％。　　 2.3、回收试验:Rochecobash232检测NT-proBNP的回收率为96.3％和98.6％;Rochecobash232检测cTnT的回收率为96.7％～101.4％。　　 2.4、抗干扰试验:溶血血红蛋白对正常NT-proBNP和cTnT的测定值影响较大(±15％)，对异常NT-proBNP和cTnT的测定值影响较小(±10％);高浓度总胆红素直接导致无法测定NT-proBNP，对正常cTnT的测定值影响较大(±15％)，异常cTnT测定值影响较小(±10％);甘油三酯对正常NT-proBNP和cTnT的测定值影响较大(±15％)，异常NT-proBNP和cTnT的测定值影响较小(±10％)。　　 研究结论　　 1、Rochecobash232便携式检测仪NT-proBNP的检测性能指标良好，临床可接受。　　 2、Rochecobash232便携式检测仪cTnT的检测性能指标良好，临床可接受。