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子痫前期（preeclampsia，PE）是妊娠20周以后出现的以高血压和蛋白尿为主要临床症状的疾病，围产期母儿死亡的原因之一，发病率约为2.5-3％，可以导致严重的多系统器官损害，威胁孕产妇生命。大多数研究者认为滋养细胞的侵袭缺陷是导致子痫前期发病的主要原因，但影响滋养细胞侵袭能力的原因尚未阐明，临床上亟需针对子痫前期有效的预测和诊治手段。 印迹基因是指哺乳动物基因组中依赖于亲本来源的特殊等位基因产生修饰，进而引起等位基因不对称表达的一小部分基因。许多印迹基因在胎盘中表达，有的表现出胎盘的组织特异性。基因组印迹参与调节滋养细胞的分化、增殖、迁移和侵袭，是影响胎盘形成和胚胎发育最重要的途径之一，胎盘是印迹基因发挥功能最重要的器官之一。上述结果提示，一些印迹基因的异常表达与子痫前期的发生发展相关，阐明印迹基因在子痫前期的发生发展中的作用，将为子痫前期的治疗提供新途径。本研究中，我们关注印记基因PEG10，有研究表明PEO10在子痫前期患者胎盘中mRNA和蛋白水平显著下降。但PEG10是否影响滋养层细胞的侵袭能力，进而参与子痫前期的发生发展及相关机制仍需深入研究。PEG10是2001年Ono等用cDNA微阵列在肝细胞癌组织中发现的一个新的父系表达的印迹基因，主要表达在人和小鼠胎盘中。有研究认为PEG10在胎盘发育过程中起重要作用，可能是子痫前期发生发展的关键因素之一。 MicroRNAs(miRNAs)是近年来发现的一类长度为19-25个核苷酸的非编码小分子RNA，由具有发夹结构的、约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工生成。它主要通过与靶基因mRNA3非翻译区(3 untranslation region，3UTR)的完全或不完全配对，降解靶基因的mRNA或抑制其翻译，从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动。有研究显示在子痫前期的胎盘中，miR-34c-5p表达显著下调。miR-34c-5p属于miR-34基因簇，该基因簇共包括miR-34a，miR-34b和miR-34c-5p三个成员。miR-34a位于染色体1p36，miR-34b和miR-34c-5p位于染色体11q23上。曾有研究认为miR-34a参与调控滋养细胞的迁移和侵袭功能。这些研究结果都显示miR-34a可能参与子痫前期的发生和发展。在通过生物信息学分析显示在PEG103-UTR存在miR-34a的结合位点。因此推测miR-34a可能通过调控印记基因PEG10的表达从而参与到子痫前期发生发展的病理机制中去。 结合国内外研究现状和前期的研究结果，本文提出如下工作假说:在子痫前期胎盘组织中异常表达的miR-34基因簇成员miR-34a可能通过调控印记基因PEG10的表达，从而参与子痫前期的发生发展。经检索，关于子痫前期细胞滋养细胞中miR-34a通过直接调节PEG10，调节胎盘细胞滋养细胞增殖、侵袭和迁移机制的研究，目前国内外尚未见报道。为了验证上述假说，本研究探讨了miR-34a在子痫前期发生、发展中的作用，并且分析了潜在的分子机制。 目的: (1)明确miR-34a在子痫前期与对照组胎盘组织中是否具有差异表达。 (2)在绒毛外滋养细胞株中过表达miR-34a，探明miR-34a与PEG10之间的靶向关系，以及miR-34a在转录和翻译水平对PEG10的调控作用。 (3)明确miR-34a通过PEG10对绒毛外滋养细胞系HTR/SVneo的增殖、侵袭功能的调节作用。(HTR-8/SVneo细胞由Charles H.Graham教授馈赠Queens University，Kingston, Ontario, Canada)。 研究方法: (1) Real-time PCR检测正常和子痫前期胎盘miR-34a的表达水平。 (2)建立miR-34a过表达的绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo。 (3)检测过表达miR-34a的HTR8/SVneo细胞的增殖、侵袭情况，并初步确定miR-34a对PEG10的表达影响。 (4)荧光素酶报告基因检测miR-34a与PEG10的直接作用和关键结合位点 (5)检测miR-34a与PEG10共同在HTR8/SVneo细胞过表达，对滋养细胞功能的影响。 结果: (1) miR-34a在子痫前期中的表达显著高于正常孕妇的胎盘组织。 (2)建立miR-34a过表达的HTR8/SVneo滋养细胞， (3)实验表明，滋养细胞转染miR-34a后，细胞的增殖和侵袭能力受到抑制。此外，细胞中升高的miR-34a可以抑制PEG10的表达。 (4)生物信息学预测和荧光素酶报告基因实验发现PEG10可能是miR-34a下游的一个靶点。 (5)实验表明，miR-34a直接作用于PEG10，使其表达下调，从而显著抑制HTR8/SVneo滋养细胞的侵袭。 结论: miR-34a是滋养细胞侵袭的潜在抑制因子。 miR-34a能够通过作用于PEG10调控滋养细胞侵袭过程，从而参与子痫前期的发生与发展，对于子痫前期的预测和治疗具有一定的意义，PEG10是它的一个新的、重要的靶点。