血栓性疾病具有较高的致残率和死亡率。溶栓剂的使用，能够通过直接或间接激活纤溶酶原的方式溶解血栓，有效的保护心脏等重要组织，明显提高患者的生存率。与目前临床上使用的溶栓剂相比，来源于金黄色葡萄球菌的分子量约为15KD的葡激酶具有独特的溶纤特性，如：对血栓尤其是富含血小板的动脉血栓具有较高的溶解能力；发挥溶纤作用的速度快；对血纤维蛋白的特异性好；价格低廉。 本文直接以临床来源的金黄色葡萄球菌总DNA为模板，利用PCR方法扩增获得了包括葡激酶结构基因、SD序列、-10、-35序列的730bpDNA片段。将所得的PCR产物插入E.coli质粒pUC18中进行核苷酸序列测定，证实所得PCR产物核苷酸序列与文献报道的葡激酶Sak42D基因完全一致。分别将所得的葡激酶基因克隆到链霉菌质粒pIJ487和pIJ459中，得到两个重组表达质粒pIJ487SAK及pIJ459SAK。质粒pIJ487SAK中葡激酶基因的转录由自身启动子调节；质粒pIJ459SAK中葡激酶基因的转录则受到葡激酶基因上游的链霉菌erm强启动子及自身启动子的双重调节。 将上述两个重组质粒分别转化变铅青链霉菌TK54，获得了分别含有重组质粒pIJ487SAK和重组质粒pIJ459SAK的两株基因工程菌。基因工程菌发酵上清液的SDS-PAGE分析表明在15KD处存在特异性蛋白质条带，与文献报道的葡激酶分子量大小相同；溶纤平皿法可测出发酵上清液具有溶纤活性。这表明两株基因工程菌均能成功地将葡激酶分泌到发酵液中，且具有溶纤活性。将发酵液用60％（NH₄）₂SO₄沉淀得到的葡激酶粗品经过葡聚糖凝胶G-75和G-50两步层析后纯度明显提高。反相高效液相色谱（RP-HPLC）分析结果表明，纯化得到的葡激酶保留时间与标准葡激酶一致，且纯度大于78％。 本文首次报道了葡激酶基因在变铅青链霉菌中的成功分泌表达，为进一步的研究以及大规模的工业生产奠定了基础。