炎性刺激因子对小鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的研究

来源 :青岛大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sophia_deng
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目的观察不同浓度的LPS、NNK对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖以及对细胞蛋白NF-κB、CUGBP1表达的影响。方法体外分离、纯化、扩增同种小鼠BMSCs,MTT法检测炎性刺激因子在不同浓度时对小鼠BMSCs增殖的影响;免疫细胞化学染色定位检测NF-κB和CUGBP1在细胞内的表达和分布;Western blot定量检测细胞蛋白NF-κB和CUGBP1的表达。结果MTT实验结果显示,不同浓度的LPS、NNK和LPS联合NNK均能促进小鼠BMSCs的增殖,其中LPS12.5μg/ml、NNK10μg/ml、LPS12.5μg/ml联合NNK10μg/ml组对小鼠BMSCs增殖的促进作用最为明显;免疫细胞化学染色结果可见在相同浓度刺激因子孵育不同时间的条件下BMSCs细胞蛋白NF-κB和CUGBP1在细胞内表达的位置不同,在LPS48小时组中,NF-κB几乎在所有的细胞核中成阳性表达,但在LPS24小时组和LPS96小时组中NF-κB在细胞核表达较少,主要表达与细胞质中。当经过LPS孵育后,CUGBP1在细胞质和细胞核中呈阳性表达,在一些细胞中主要表达于细胞核中。NF-κB在NNK48小时组的细胞中主要表达于细胞核中,在NNK24小时组和NNK96小时组主要表达于细胞质中。在NNK24小时组中,CUGBP1主要表达于细胞质中,但在NNK48小时组和NNK96小时组中CUGBP1主要表达于细胞核中。在LPS联合NNK组内,在24小时组和96小时组中,NF-κB在细胞核中的表达显著高于48小时组。在24小时组中,CUGBP1阳性细胞核数量明显高于48小时和96小时;Western blot实验结果可见NF-κB最高表达量分别出现在LPS48h,NNK24h和LPS联合NNK24h,CUGBP1最高表达量分别出现在LPS96h,NNK48h和LPS联合NNK24h。结论炎性刺激因子可能通过激活NF-κB并上调CUGBP1在细胞中的表达促进BMSCs的增殖。
其他文献
人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1)是传统中药人参的主要药理成分。研究表明,Rg1具有抗炎、抗氧化、抗神经毒素等作用。小胶质细胞是神经系统中一种起免疫功能的细胞,过度激活的小胶质细胞会分泌一系列的炎性因子以及合成炎性因子的关键限速酶,这些物质会引发神经元损伤、死亡。因此小胶质细胞在神经退行性疾病的发生及发展中扮演着非常重要的作用。已有很多实验证据表明人参皂苷Rg1具有抗炎作用,但人参皂